[만점레포트] western blot의 과정과 결과분석법

소개글

[만점레포트] western blot의 과정과 결과분석법에 대한 보고서 자료입니다.

목차

I, Introduction
1) Western blot의 정의와 원리
2) Western blot에서 사용되는 membranes
-membrane의 종류: nitrocellulose membrane, PVDF membrane
-membrane에 protein이 붙는 원리
3) Transfer buffer
-transfer buffer의 조성
-methanol이 들어가는 이유
4) Blocking solution
-blocking이 필요한 이유
-BSA와 skim milk의 차이점
5) Antibody
-antibody란 무엇인가
-antibody의 상업적 용도

II. Materials & Methods
1)실험재료
2)SDS gel running의 방법 및 과정
3)transfer의 방법 및 과정
4)destaining과 blocking과정
5)primary antibody 붙이기
6)secondary antibody 붙이기
7)ECL solution
8)blotting

III. Results
-검출된 band가 size marker와 비교해서 분석하고자하는 단백질의 크기와 일치하는가?

IV. Discussion
-다른 위치에도 band가 검출된 이유
-그 외 문제 원인 분석

본문내용

Ⅰ. Introduction
1. Western blot
-정의: protein mixture를 polyacrylamide gel에서 크기에 따라 분리하고, membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후, 항체를 이용하여 membrane표면에 붙어있는 protein들 중 원하는 protein의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다.
-목적: protein mixture로부터 분리된 특정 protein을 identification하는 것이 그 목적이다.
-원리: 1)membrane으로의 electro-transfer
2)항원-항체 반응: 항원-항체 반응은 매우 specific하기 때문에, antibody는 자신과 binding하는 antigen(protein)에 해당하는 band에만 specific하게 binding한다. 따라서 size에 따라 분리된 상태로 membrane으로 옮겨진 protein band들에서, protein of interest와 binding하는 antibody를 처리하여, protein of interest를 관찰한다. 따라서 protein of interest의 size와 맞는 위치에, antibody가 binding하며 band가 보이게 된다.
-실험목적: acrylamide gel을 이용하여 protein을 크기 별로 분리한 후, Western blot analysis를 통해, protein을 membrane에 옮긴 뒤 protein of interest인 alkaline phosphatase(AP)와 특이적으로 결합하는 antibody를 이용해서 단백질 혼합물로부터 AP를 검출 및 확인하고자 한다.

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