[만점레포트] transfection, immunoprecipitation 과정 및 결과 분석 방법

소개글

[만점레포트] transfection, immunoprecipitation 과정 및 결과 분석 방법에 대한 보고서 자료입니다.

목차

Ⅰ. Introduction & Methods
1.cell culture
-실험도구: HEK293T cell, media(DMEM), FBS(Fetal bovine serum), antibiotics/antimycotics, trypsin/EDTA, PBS 각각의 기능
-실험목적
-실험과정

2. 세포수세기
-필요성
-실험도구: trypan blue, hemocytometer의 기능
-실험목적
-실험과정

3. transfection
-실험목적
-실험도구: PEI, FLAG tagged A plasmid, serum free medium의 기능
-실험과정

4. Immunoprecipitation
-실험목적
-실험도구
-실험원리
-실험방법

5. Western blot
-실험목적
-실험도구: PVDF membrane, FLAG antibody, anti-mouse secondary antibody, ECL solution의 기능


II. Results
결과해석 방법

III. Discussion
해당 결과를 얻은 과정 및 원리

본문내용

Ⅰ. Introduction & Methods
1.cell culture
-실험도구: ①HEK293T cell: 태아 kidney에서 얻은 cell line으로, SV40 T-antigen을 상시 발현한다. 외부에서 넣어준 plasmid DNA는 안에 SV40 origin을 가지고 있어, HEK293T cell의 T-antigen이 SV40 origin을 activation시키면, 원하는 gene들을 가지고 있는 plasmid가 내부에서 계속 복제(증폭)된다. 따라서 해당 gene들이 과발현되어 관찰에 유리하다는 이점이 있어 transfection 시에 많이 사용된다.
②media(DMEM): 세포 증식에 필수적인 영양분(많은 glucose와 필수 아미노산들)가 들어가 있어, HEK293T cell 포함 animal cell culture에 많이 사용되는 media다. 세포가 증식하며 생성〮방출된 노폐물이 배지를 산성으로 만들어 세포 생존에 나쁜 영향을 미치게 되는데, DMEM의 Phenol red 성분은 산성에서 붉은색에서 황색으로 바뀌기 때문에, 이런 세포의 상태를 가시적으로 나타내어 cell 건강상태 유지에 도움을 준다.
③FBS(Fetal bovine serum): 세포증식에 보편적으로 사용되는 소의 태아혈청으로, 세포의 성장과 기능에 관여하는 호르몬을 제공하고, 세포의 부착과 확산인자를 제공하며, 중금속, 지질 등의 운반 단백질을 제공한다.

키워드

transfection,   immunoprecipitation,   면역침전,   HEK293T,   DMEM,   trypan blue,   hemocytometer,   FLAG,   polyethylenimine