[일반화학실험 A+ 1등 레포트] 실험 24. 단백질 풀림 실험 예비보고서

소개글

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목차

실험목표
이론
실험 전 예비보고서
기구 및 시약
실험 방법

본문내용

다음에 피펫의 ‘Volume adjustment knob’를 돌리면서 원하는 양으로 조정한다.
피펫의 끝에 멸균된 피펫 팁을 꽂는다.
1st stop까지 피펫의 푸시버튼을 천천히 누른 상태로 채취한 시료 용액에 피펫 팁을 담근 후, 원 위치까지 버튼을 천천히 올린다.
용액을 옮길 용기에 1st stop까지 피펫의 푸시버튼을 눌러 용액을 분배한다.
팁에 남아있는 용액을 2nd stop까지 푸시 버튼을 눌러 남아 있는 시료를 빼낸 다음 피펫의 위쪽에 있는 Tip ejection 버튼을 눌러 피펫 팁을 분리한다.
24-well plate
안료를 제작하거나 확산 반응 등을 확인할 때 사용
1. 피펫이나 스포이드를 이용해 홈에 용액이나 시료
를 넣는다.
2. 교반 등을 시행할 수 있으므로 여유를 두고 채운
다.
노란색, 초록색 LED
회로의 작동 여부를 확인하기 위해 사용
1. 다이오드의 긴 다리는 (+)극과 연결하고 짧은 다
리는 (-)극과 연결한다.
2. 실험 중 긴 수명과 낮은 온도가 필요시 짧은 다리
에 저항을 연결해준다.
3. 스위치를 이용하거나 전극을 직접 연결하거나 제
거하며 켜고 끈다.
원심분리기
시료를 용액과 침전물을 명확하게 분리시키기 이위해 주로 활용한다.
시료를 담은 원심 분리기 용 튜브를 삽입한다. 이때, 로터를 중심으로 대칭이 되도록 배열한다.
속도와 시간을 설정한다.
도어를 닫고 원심 분리가 완료될 때까지 기다린다.
spitulina 알약
단백질 풀림 실험을 진행하기 위해 활용한다.
막자사발에 넣고 으깬 후, 약 5분간 충분히 갈아준다.
세포벽이 깨지도록 막자와 막자사발의 거친 면을 이용하여 충분히 힘을 주어 간다.
원심 분리기에 넣고 원심 분리 한다.
(2) 시약 설명
명칭
분자식
구조
분자량
(g/mol)
밀도
()
끓는점
(℃)
녹는점
(℃)
특징
(색, 상태, 냄새)
위험성 및 주의사항
sodium phosphate
239.25
1.064
402.41
34
흰색, 고체, 무취
물질과 접촉한 경우에는 바로 20분 이상 흐르는 물에 눈을 씻어 내어야 함
유해하므로 접촉 시 산업의학 전문의의 의학적인 조치를 받아야 함
urea
60.06
1.32
N/A
133
흰색, 고체, 무취
피부 부식성 및 자극성이 존재함
심한 눈 손상성과 자극성이 존재하므로 주의가 필요함
특정표적장기 독성이 존재함
티오시안 칼륨
KSCN
97.18
1.89
500
173
무색, 흡습성 고체, 무취
급성 독성과 피부 부식성/ 및 자극성이 존재함
눈 손상성 및 자극성 극심하게 존재함
생식독성이 존재함로 주의가 필요함
sodium chloride
NaCl
58.44
2.16
1413
801
무색, 흰색, 고체, 무취
고온에서 분해되어 독성가스 생성 가능성 존재. 그러나 상온에서 안전한 편에 속함.
sucrose
342.30
1.59
697
186
흰색, 고체, 무취
N/A
ethanol
46.0684
0.79
78.5
-114.1
무색, 액체
고인화성 액체나 증기로 눈에 심한 자극을 일으킴
hydrochloric acid (염산)
HCl
36.46
1.49
-85
-114
무색. 기체. 자극적인냄새
가열 시 폭발. 타는 동안 열분해나 연소에 의해 매우 유독하고 자극적인 가스가 발생될 수 있음

sodium hydroxide
NaOH
39.997
2.13
1390
318
흰색,
고체,
무취
금속을 부식시킴. 피부에 심한 화상을 입히며 접촉 시 유해.
실험 방법
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Part Ⅰ : 단백질의 추출
1. Spirulina 알약 하나를 막자사발에 넣고 으깬 후, 약 5 분간 충분히 갈아준다. Spirulina의
세포벽이 깨지도록 막자와 막자사발의 거친 면을 이용하여 충분히 힘을 주어 갈아준다.
2. 갈은 Spirulina 시료를 원심분리기용 튜브 2 개에 나누어 넣는다.
3. 각 튜브에 phosphate buffer 용액을 8 mL 씩 가하고, 단백질이 우러나오도록 유리막대로
저어준다 (~5 분 정도).
4. 튜브를 원심분리기에 넣고 약 3 분간 원심분리 한다. 튜브를 원심분리기에 넣을 때, 두 개의
튜브는 서로 정반대편에 위치하여 균형을 맞추어야 한다.
5. 거름종이를 접어 깔때기에 넣은 후 증류수로 적신다.
6. 깨끗한 삼각플라스크에 깔때기를 설치하고, 원심분리한 튜브에서 용액 부분만을 조심스럽게
따라내어 거른다. (이때 파스퇴르 피펫이나 스포이드를 사용하여 용액을 옮기는 것도 좋은
방법이다.) 삼각플라스크의 단백질 용액은 짙은 푸른색을 띠고 투명해야 하며, ~12 mL 이상
되어야 한다.
Part Ⅱ : 여러 용액에서 단백질 접힘/풀림 (protein folding/unfolding)
1. 24-well plate에서 가장자리 쪽의 10 개의 well에 추출한 단백질 용액을 0.7 mL씩 넣고, 각
well에 아래 표에 주어진 용액들 중의 하나를 2 mL 씩 가한다. Well에서 용액이 넘칠 수
있으니, 용액은 정해진 양만을 가한다.
2. 혼합 용액을 유리막대로 잘 저은 후 변화를 관찰한다. Well에서 용액이 넘치지 않도록
주의한다.
3. 각 well의 용액에 노란색 LED를 비추고 붉은색 형광이 방출되는지 관찰한다. 또한, 초록색
LED를 비추고 형광이 방출되는지 관찰한다.
Part Ⅲ : 단백질 구조에 대한 온도의 효과
1. 시험관 하나에 추출한 단백질 용액 1 mL와 phosphate buffer 용액 3 mL를 가하고, 잘 섞은
후 뜨거운 물(85 ~ 90 ℃)이 들어 있는 비커에 넣는다.
2. 또 시험관 하나에 추출한 단백질 용액 1 mL와 phosphate buffer 용액 3 mL를 가하고, 잘
섞은 후 얼음으로 채워진 비커에 넣는다.
3. 두 시험관 용액의 변화를 관찰한다.
4. 각 시험관의 용액에 노란색 LED를 비추고 붉은색 형광이 방출되는지 관찰한다. 또한,
초록색 LED를 비추고 형광이 방출되는지 관찰한다.
5. 뜨거운 물에 넣었던 시험관을 다시 얼음으로 채워진 비커에 넣고 변화를 관찰한다.
6. 시험관을 꺼내어 노란색 LED와 초록색 LED를 비추고 형광이 방출되는지 관찰한다.

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