PCR에 대하여...

목차

1. PCR의 원리와 이를 이용한 응용분야에 대해 설명하세요.

2. PCR 반응에 필요한 시약 및 효소의 종류와 각각의 역할에 대해 설명하세요.

본문내용

입자 계면(界面)에서의 전기운동학적인
전위차(電位差)에 의해서 변하며, 전해질이 흡착되면 이 전위차의 크기가
변화하므로 용액 속의 전해질의 농도나 종류에 따라 영향을 받는다.
또, 입자의 크기와 형태에 따라서도 변한다. 따라서 콜로이드입자의 각종
성질이 같다고 해도 어느 하나가 다르면 전기이동에 의해서 입자를 분리
할 수가 있다. 이와 같은 방법에 의해서 여러 가지 분석을 할 수가 있지
만, 특히 단백질의 분석에 중요하다. 또한 전기이동은 점토의 정제(精製)나
합성수지 ·고무 등을 전착(電着)시키는 일 등에 이용된다.
아가로즈 겔을 이용한 전기영동은 가장 큰 거대 분자와 그 복합체인 바이 러스, 효소 복합체, 지질단 백질(lipoprotein), 핵산(nucleic acid)등의 전기영 동에 이용되고 있다.
DNA를 분리, 정제하여 확인하는 방법으로는 아가로스 겔을 이용하는 전 기영동법이 보편적으로 사용된다. 이 방법은 간단하고 소요되는 시간이 짧 을 뿐 아니라 밀도, 기울기, 원심분리법으로는 분리할 수 없는 DNA조각들 의 혼합물을 분리할 수 있다. 그뿐만 아니라 겔 상에서 DNA는 브롬화에 티듐(ethidium bromide)과 같은 형광성 시약으로 처리하면 염색되므로 자 외선 하에서 DNA를 직접 관찰할 수 있다. 아가로오스 겔을 통한 DNA의 이동속도는 DNA 분자의 크기, 아가로오스의 농도, DNA의 형태, 전류의 세기, 염기 조성 및 온도 등에 좌우된다.
(2) 겔에서의 전기영동의 원리
겔은 3차원의 그물구조[網目構造:공극크기]를 가지는 것으로 생각되며, 이
공극크기 분포의 상한(上限)보다 큰 분자는 이동하지 않고, 하한(下限)보다
작은 분자는 신속히 이동한다. 공극크기 분포 내의 분자는 그 형상 ·크기
및 실효전하(實效電荷)에 따라 이동속도가 다르므로 분리될 수 있다. 폴리
아크릴아미드겔은 아크릴아미드, 다리걸침제[架橋劑]의 농도 및 그 양비(量
比)를 변화시킴으로서 분리하려고 하는 시료에 맞는 공극크기의 겔을 조제
할 수 있다. 겔농도 3~30%를 사용하여 분자량 수천에서 100만 정도의 단
백질도 분리할 수 있다. 즉, 젤에 핵산혼합물을 loading하고 양 끝에서 전 류를 흘려 주면핵산은 음전하를 띠고 있기 때문에 음전극으로부터 양전극 으로 이동 한다. 이때 핵산이 젤을 통해 이동하는데, 작은 것은 빨리 가고 큰 것은 천천히 간다. 이런 원리로 크기별로 핵산을 분리한다.

키워드

PCR,   이중나선 모양,   DNA.,   전기영동,   아가로오스 겔