<실험> Affinity chromatography

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목차

1. Introduction

2. Materials & Methods
(1) Ni-NTA column을 이용한 단백질 정제
(2) SDS-PAGE(polyacrylamide gelelectrophoresis)

3. Ni-NTA & SDS-PAGE Result

4. Discussion
Q1) Elution band에서 원하는 밴드 외에 나타난 다른 단백질의 밴드를 없애기 위해 바꿔줘야 할 condition은 무엇일까?
Q2) Affinity chromatography 중에서
Ni-NTA vs. GST(glutathione S-transferase) →elution 원리의 차이
Q3) SDS-PAGE에서 APS, TEMED, sampling buffer조성

5.Reference

본문내용

며 TEMED는 persulfate로부터 자유라디칼의 생성을 촉매 함으로써 중합을 개시한다.
3) sampling buffer조성
- 5x Sample Buffer 조성, 10ml
0.6ml 1M Tris-HCl(pH6.8)
60mM
5ml 50% glycerol
25%
2ml 10% SDS
2%
sodium dodecyl sulfate
(ionic detergent)
0.5ml 2-mercaptoethanol
14.4mM
단백질복합체를 개별 단백질로 해리하여 분석하는 방법으로 disulfide bond를 해리 시켜주는 reducing agent
1ml 1% bromophenol blue
0.1%
색소로서 분자가 작기 때문에 전기영동 할때 빨리 이동하므로 이 색소가 겔로부터 유출되기 직전에 영동을 멈추면 됨
0.9ml H2O
※ 각 단백질이 가지고 있는 전하량과 분자의 모양이 다양함.→ SDS는 단백질에 결합하 여 원래의 전하에 관계없이 단백질 분자량에 비례하는 양만큼 음전하를 가짐.→SDS의 결합으로 단백질의 고유한 3차 구조를 잃고 linear 상태로 바뀜으로 순전히 분자량에 따라 분리가 됨
5.Reference
http://biosci.snu.ac.kr/
http://www.elpisbio.com/html-sub/protocols/Protocols.htm
http://www.uiduk.ac.kr/%7Ekchan/01lecture/016plant_lab/0161week14
/electrophoresis.htm
http://www.dnai.co.kr/contents/cont_01.html

키워드

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