미생물동정에이용되는생화학적방법

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미생물동정에이용되는생화학적방법에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Catalase test

2. Oxidation-Fermentation(OF)test

3. Esculin 가수분해

4. ONPG(β-Galactosidase)test

5. Methyl Red test

6. Voges-Proskauer test

7. Indole 생성반응

8. Phenylalanine deaminase test

9. 아미노산 탈탄산 효소 시험

10. 황화수소(H2S)생성 시험

11. Oxidase test

12. Gelatine 액화시험

13. DNase test

14. Coagulase test

15. Urea 분해시험

16. 용혈성 시험(Hemolysis test)

17. CAMP test

18. Citrate 이용능 시험

19. 질산염 환원시험(Nitrate reduction test)

20. 담즙 용해시험(Bile solubility test)

21. 운동성 시험(motility test)

22. Tween 80 가수분해 시험

23. Optochin 감수성 시험

24. Sodium hippurate 가수분해시험

25. Niacin 시험

26. CTA(Cystine Trypticase agar)배지를 이용한 Carbohydrate fermentation test

27. KIA(Kligler′s iron agar)/TSI(Triple Sugar iron)배지를 이용한 test

28. β-lactamase test

29. Lecithinase test

30. Litmus Milk test

31. Porphyrin-δ-Aminolevulinic(ALA) test

32. Pyrrolidonyl-β-Naphthylamide Hydrolysis(PYR) test

본문내용

b. 사면 황색, 고층 황색(A/A)-glucose와 lactose를 gas없이 분해
c. 사면 무변, 고층 황색, 균열(NC/AG)-glucose를 분해하여 CO2(gas) 생성
d. 사면 황색, 고층 황색, 균열(A/AG)-glucose와 lactose를 분해 CO2(gas) 생성
e. 사면 무변, 고층 무변(NC/NC)-두 종의 당 전부 분해하지 않음
6) 참고사항 : 접종부위가 흑색으로 변하는 것은 황화수소의 생성으로 인하여 생긴 황화철(FeS) 때문이다. 이 배지에서 glucose는 분해하지만 lactose를 분해하지 않는 균종은 사면에 변화가 없이 고층만 산화작용으로 황색으로 변한다. 실제로는 glucose 분해로 사면도 일단은 황색으로 변했다가 호기성인 상태에서의 환원작용으로 원래의 색으로 돌아간 것이며 혐기성 상태인 고층에 산화된 대로 남아 있어 황색으로 보이는 것이다.
28. β-lactamase test
1) 원리 : 페니실린이 페니실린아제(세균성 대사산물)와 결합하면 페니실린이 분해되어 페니실린산이 생성되는데 이때 생긴 pH의 변화를 측정
2) 목적 : Penicillin 내성균주(PPNG)의 여부를 동정하기 위함
4) 방법 : a. 깨끗한 슬라이드에 상품으로 된 β-lactam disk를 놓고 배양된 집락을 백금이로 따 disk에 바른다.
b. 증류수(pH7.0) 한 방울로 균 바른 disk를 적신 다음 disk의 변색을 관찰한다.
5) 결과판정 : 양성- BCP를 지시약으로 쓴 disk에 함유된 penicillin이 PPNG가 생성한 penicillinase에 의하여 분해되어 penicilloic acid가 생산되어 황색으로 변한다.
음성- disk 본래의 색(purple)에 변화가 없다.
29. Lecithinase test
1) 원리 : 난황중의 지질단백인 lecithovitellin의 분해효소인 Lecithinase의 유무를 측정
2) 목적 : clostridium과 Gram 양성간균 (bacillus)의 분류에 쓰임.(C. perfringens, C. serdellii)
3) 배지 및 시약 ; 난황배지(egg yolk)
4) 방법 : 균을 난황배지에 접종한후 관찰
5) 결과판정 : 양성- 집락주위 혼탁
6) 참고사항 : 이 반응은 Lecitjinase에 의해서만 일어나는 것이 아니고 다른 유리지방 (free fat) 또는 지방 단백복합체에서 분리된 지방들의 작용으로도 양성결과를 보인다.
30. Litmus Milk test
1) 원리 : a. 산 생성 (acid production)
어느 세균은 lactose를 가수분해(hydrolysis)하여 glucose와 galaxtose를 생성하며 이것들은 다시 세균효소에 의하여 lactic acid로 발효하므로 리트머스의 변색반응으로 판독이 가능
b. 응유(curd)와 유장의 형성
만약 산화도가 지나치면 우유 속의 casein이 침제되며 응유 현상이 생긴다,
따라서 우유는 불용성의 응유와 유장이 생기게 된다. 응유와 유장이 생기는 또 다른 이유로는 세균의 rennin- like 효소 생성으로 인한 것이다.
Rennin은 casein을 가용성 paracasein고 peptone-like 복합체로 가수분해하며 paracasein은 우유속의 calcium과 다시 결합하여 침제현상을 일으켜 응유를 형성한다.
c. Litmus 의 환원(reduction)
세균성 환원작용에 의하여 litmus 색조가 퇴색현상을 보이는 것을 말한다,
d. 단백질의 peptone화 현상
peptone화(peptonization)란 응유된 casein의 액화현상을 말하는 것으로 만약 peptonization이 일어나면 일단 응유된 것이 서서히 융해되기 시작하며, 유액의 색이 황색으로 변하여 끝내는 보라색으로 변한다.
2) 목적 : 우유의 세균학적 검사
3) 배지 및 시약 : Litmus milk 배지
4) 방법 : a. 균주를 Litmus milk 배지에 접종한 다음 37도에 배양한다
b. 배양후 2.4.6 일간에 걸쳐 결과를 관찰한다.
31. Porphyrin-δ-Aminolevulinic(ALA) test
1) 원리 : Hemophilus균 중 X인자를 필요로 하지 않는 균은 aminolevulinic acid와 만나면 hemin 생체합성(biosynthesis)의 중간산물인 porphobilinogen과 porphyrin을 분비한다
2) 목적 : Hemophilus균속의 X인자 필요성을 신속하게 보기 위함
3) 배지 및 시약 : 배지 - NAP, BAP와 chocolate ager
시약 - Aminolevulinic acid
4) 방법 ; 기질- pH 6.9 0.1M phosphate buffer에 0.8mM MgSO4와 2mM delta-aminolevulinic acid hydrochloride를 혼합하여 0.5ml씩 작은 시험관에 분주 한다.
접종- 상기 기질액에 배양된 집락을 진하게 푼다음 4시간 동안 부란기에 둔다.
5) 결과판정 : Wood light에 가능하면 암소에서 노출시킨다. 이때 적색 형광을 발산하면 양성(X인자 불필요 균주)으로 판독한다.
32. Pyrrolidonyl-β-Naphthylamide Hydrolysis(PYR) test
1) 원리 : PYR이 세균의 aminopeptidase 효소에 의하여 분해되면 유리 β-naphthylamide가 생성되며 여기에 N, N-dimethylaminocinnamadehyde를 첨가하면 적색이 생기는 원리
2) 목적 : 연쇄상구균중 Group A와 Group D중 Enterococcus균종을 다른 균들과 분류하기 위하여 사용
3) 배지 및 시약 : PYR 액체배지(2ml 분주), PYR(0.01% p-dimethylaminocinnamaldehyde)시약
4) 방법 : a. 전형적인 시험균으 집락을 접종한다음 35℃에서 4시간 배양한다.
b. PYR 시약을 배양액에 떨구어 1 분 내에 적색으로 변하는지를 본다.
5) 결과판정 : 양성- S. group A와 S.group D 중 장구균
음성- S. group B와 S.group D 중 비장구균

키워드

미생물,   동정,   생화학적