PCR(polymerase chain reaction, 중합효소연쇄반응)

소개글

PCR(polymerase chain reaction, 중합효소연쇄반응)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

PCR(polymerase chain reaction, 중합효소 연쇄 반응)
1. PCR이란:

2. PCR의 단계

3. PCR의 구성요소

4. Studying PCR products

5. PCR의 종류

6. PCR의 용도

7. 사용증례

본문내용

t를 전기영동을 사용해서 확인하면 생명체마다 각각 독특한 band를 형성하는데 이것을 가지고 생명체간의 유사성을 판별할 수 있다. 만약 두 생명체가 비슷한 종일 경우에는 band의 모양이 비슷할 것이며, 그렇지 않을 경우에는 서로 많은 차이를 나타낼 것이다. 이 RAPD PCR은 방법이 비교적 간단하고 쉬워 genome sequencing을 하기 전에 대략적인 종간의 관계를 나타내기 위해서 많이 사용된다.
(8) Touchdown PCR
이 방법은 PCR할 때 Tm(melting temperature)을 알기 위해서 하는 PCR 방법이다. PCR 과정에서 매 2 cycle 마다 annealing temperature을 1℃씩 낮춘다. 일반적으로 annealing이 Tm에서 1℃만큼 차이가 난 온도에서 일어날 때 한 cycle에 product의 양이 두배 정도 차이가 난다. Touchdown PCR에서는 2 cycle 마다 온도를 낮췄으므로 1℃에 product의 양이 4배가 차이나는 셈이다. 이것을 이용해서 Tm을 알 수 있다. (즉 온도가 1도 내려갔을 때 product의 양이 4배 증가한 과정에서의 temperature가 Tm이 된다.)
(9) Long Accurate PCR
일반적으로 PCR로는 많아야 3kb, 좀 더 이상적일려면 1kb 미만의 크기의 DNA를 증폭할 수 있으나 이 방법을 사용하면 5-40kb의 DNA도 증폭할 수 있다. 이 long accurate PCR에서는 polymerase를 두 개 사용하는데, 그중 하나가 minor-proofreading을 할 수 있어서, 긴 DNA를 증폭할 때 error rate를 감소시켜 준다.
(10) Asymmetric PCR
Single strand를 얻을 목적으로 이용하는 PCR방법이다. Primer를 두 개 사용하는데 두 primer를 농도가 100:1로 섞어 사용한다. PCR의 초기에 한쪽의 primer는 소비되어 버리고 과잉의 primer에서 single strand DNA가 생성된다
(11) Nest PCR
한번 PCR로 증폭한 DNA 단편을 한번 더 내부의 primer를 사용하여 증폭하는 방법이다. 이는 비 특이적 반응을 감소 시키며, PCR을 2회 실시하므로 감도가 상승하는 효과를 얻을 수 있다.
(12) Inverse PCR
Inverse PCR은 기존에 서열을 알고 있는 DNA의 양 옆에 서열을 알지 못하는 region이 있고, 이것을 알고자 할 때 많이 이용된다. 예를 들어
******=========****** (** 서열을 알지 못함, == 서열을 알고 있음)
이런 염기 서열에서 ** 부분을 알고자 할 때 이용한다. 제일 먼저 제한 효소로 자르고, 자른 부위를 원으로 만든다. (자른 부위가 sticky end이므로 가능하다.) 그리고 그 원으로 된 곳에다가 primer를 붙이는데, 이 때 elongation이 같은 방향으로 가도록 primer를 붙인다. Inverse라는 말은 primer가 기존의 PCR과는 다른 방향으로 간다고 해서 붙여졌다
6. PCR의 용도
1)소량의 세포로부터 어떤 유전자의 존재유무 검색
2) 유전자의 결함(deletion), 돌연변이(mutation), 유전자 서열다양성(genomic sequence variation)
3) 유전자 클로닝(gene cloning)
4) 유전자 발현정도의 측정(semiquantitative analysis of gene expression)
7. 사용증례
(1) Apo E isoform의 진단
(2) HPV의 DNA 검출
(3) HPV의 RNA 검출
(4 )PCR-SSCP 법을 이용한 유전자 다형성 검출

키워드

PCR,   중합효소연쇄반응,   중합효소,   RT-PCR,   SSCP,   RACE