일반생물학 실험보고서-단백질정량

본문내용

SO4로 분해시켜 수증기 증류를 하여 적정하거나 또는 비색하는 방법으로, 유기질소를 정량하는 가장 흔한 방법이다. 일정량의 시료에 진한 H2SO4와 분해제를 가하고 가열하면 분해 및 산화, 환원이 동시에 일어나며 시료에 포함되어 있던 질소는 일단 NH3로 변해서 H2SO4와 반응하여 황산암모늄으로 되고 분해액 속에 남게 된다. 분해액에 과잉의 알칼리를 가하여 증류시키면 암모니아가 다시 방출된다. 이 가스를 boric acid로 흡수하여 규정 알칼리 용액으로 역적정하면 전 질소량을 산출할 수 있고, 여기에 각 시료에 해당하는 질소환산계수(nitrogen conversion factor)를 곱하여 단백질 함량을 구할 수 있다. 이 방법은 혼탁 시료에도 적용된다는 장점이 있다. 하지만 아질산 염, 시안화물, 히드라진의 유도체, 니트로 및 아조 화합물 등에 대하여는 수정이 필요하다. 질소생성물은 원래 시료에 결합되어 있던 상태에 따라 달라지기 때문이다.
⑤ BCA법
Lowry 법을 계량한 방법으로 Folin 시약의 반응 대신에 Bicinchoninic acid(BCA)가 Cu1+와 복합체를 형성하여 자색으로 발색하는 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법이다. 이 방법은 단백질 종류에 따른 발색 차이가 적고, 계면활성제의 영향을 잘 받지 않으며 반응 생성물이 안정하다는 장점이 있다. 하지만 감도가 낮고, 단백질 아미노산 조성에 따른 반응이 상이하며 환원당이 존재할 때 더 민감해지는 등의 단점이 있다.
9. Reference
최신 생화학, 김을상 外 6명, 신광문화사
단백질 실험노트(上), 김승호, 월드사이언스

키워드

일반생물학,   실험보고서,   단백질,   단백질정량,   BSA,   흡광도,   BF,   Bradford assay