[생물학 보고서] DNA Isolation, PCR, 전기영동 실험

본문내용

(5ul)에 적당량의 loading dye 를 섞은 후, gel의 well에 pipette으로 조심스럽게 넣어준다.
6. 100V의 전압에서 run (30분)
7. UV trans illuminator를 이용하여 관찰한다.
-Results
*오차가 어느정도 있었던 실험이였지만
박테리아에서 DNA가 잘분리 되었으며, DNA부분의 증폭 이 제대로 이뤄졌다. 또한 UV trans illuminator 확인결과 DNA 가 크기에 따라서 잘 분리되었다.
생물학 실험
-Discussion
이번 실험은 장기간에 걸친 실험이였다 무려 3주동안 진행된 실험이었는데 실험결과는 만족하는 결과를 얻었다. 하지만 자칫하면 원하는 결과를 얻지 못할정도로 오차가 있었는데 다음번에는 조심해야될 부분인 것 같다. 단적인 예를 들자면 Column washing을 돌릴 때 뚜껑을 닫지 않아 기계안에서 평형을 이루지 못하면서 뚜껑부분이 갈리었고, 액체 양을 조절할 때 정확한 양을 담아내지 못해 실험할 때 애를 먹었다.
PCR실험에서 주의해야될 부분도 있었는데 95℃에서 DNA끼리의 수소결합을 끊어줌으로서 primer가 잘 달라붙도록 해주어야 한다. 또 primer가 붙는 단계에서는 온도 조절이 상당히 중요하다. 온도를 50~65℃로 낮추면 primer가 그들의 상보적 서열을 갖는 DNA가닥에 결합한다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA에 잘 달라붙지 않아 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮으면 primer가 잘못 결합할 확률이 높아서 정확도는 떨어지게 된다. 이런 부분에서 조심하면 된다.
이번 실험과 관련된 용어들을 한번 알아보며 discussion을 마치겠다.
DNA: 핵산(Nucleic acid)의 일종이며, 주로 세포 내에서 생물의 유전 정보를 보관하는 물질. 결합되어 있는 염기에 의해 구분되는 네 종류의 nucleotides(A,T,G,C)가 중합되어 이중 나선 구조를 이룬다.
Template DNA: pcr에서 증폭의 target이 되는 DNA로 모든 종류의 유전체, 플라스미드 DNA등이 사용된다.
DNA polymerase: DNA를 복제하는 효소로 Primer Extension 단계에서 dNTPs와 함께 넣어 Primer의 연장을 돕는다. TaqDNA polymerase는 THermus aquaticus에서 분리한 효소로 고온에서 안정적인 성질을 가지고 있어 pcr과정 중의 높은 열에서도 견딜 수 있어 많이 사용된다.
-References
-20120405 DNA isolation.pptx
-PCR(polymerase chain reaction).ppt
-전기영동_(electrophoresis).ppt
-핸드폰 사진
-http://blog.naver.com/hongmsoo?Redirect=Log&logNo=150016260288
http://blog.yahoo.com/consistency1222/articles/145124
http://blog.naver.com/ryu091011?Redirect=Log&logNo=110108173068

키워드

DNA Isolation,   PCR,   전기영동 실험