생화학A+) RNA 분리 및 농도측정과 전기영동법

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생화학A+) RNA 분리 및 농도측정과 전기영동법에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

영양 생화학 실험
실험일: 학번: 이름:
제출일: 실험조:
1. 주제 RNA 분리 & RNA 농도 측정 및 전기영동
2.
재료
및

기구 기구 1) RNA 분리
centrifuge, e.p tube, pipette, vortex.
2) 농도 측정
UV-Vis Spectrophotometer, Cuvette, pipette, e.p tube
3) 전기영동
Mini gel running kit, UV illuminator, vortex, TAE(tris-acetate) buffer
Microwave oven, pipette, elderlyflask(삼각플라스크), electrophoresis tank, comb, cuvette
시약 1) RNA 분리
RNA sample(hepatic cell), chloroform, ice, isopropanol, DEPC, PBS, Trizol, 70% ethanol
2) 농도 측정
RNA sample, DEPC
3) 전기영동
RNA sample, 1X TAE,6X loading dye, DDW, EtBr, 1kb RNA ladder(size marker).
3.
실험 목적

및
원리 목적 mouse의 hepatic cell로부터 RNA를 분리하고, 분광광도계를 이용하여 RNA의 농도와 순도를 분석한다. 또 agarose gel 상에서 electrophoresis 하여 목적하는 RNA의 농도와 크기를 분석할 수 있다.
원리
1) RNA 분리
배지에서 배양시킨 hepatic cell을 Trizol을 이용해 plate로부터 분리한 후, RNase 저해제 등을 처리하여 몇 번의 원심분리 단계를 거쳐 RNA를 추출한다. Trizol은 RNA 분해효소 억제제인 guanidinium isothiocyanate가 포함되어 있어 세포를 파괴시키고, 기계적으로 균질화시키는 역할을 한다.


2) 흡광계를 이용한 농도, 순도 측정.
핵산이 함유된 용액에 의해 흡수되는 자외선의 양은 용액 속에 있는 핵산의 양과 비례한다. 보통 260nm 파장에서 측정하며, 이 파장(A260)에서 1.0은 ml당 RNA 40ug에 해당한다. RNA 용액에 의해 흡수되는 자외선의 양은 용액 속에 있는 RNA 용액의 260nm와 280nm에서 흡광도의 비율(A260/A280)은 1.8이다. 1.8이하의 비를 갖는 것은 페놀이나 단백질 같은 불순물이 있다는 것을 의미한다.


3) Agarose gel 상에서의 전기영동.
동물의 세포로부터 분리한 RNA를 agarose gel에서 전기를 걸어 분리하면 UV하에서 band의 밀도를 통해 농도를 알 수 있으며, standard marker와의 비교를 통해 크기를 분석 할 수 있다.
전기이동은 전기장이 걸린 한천겔(agarose gel)에서 DNA가 크기에 따라 분리되도록 하는 실험 방법이다. 전기 이동된 DNA는 ethidium bromide로 염색함으로써 눈으로 확인할 수 있고 그 밝기로 농도를 추정할 수 있다. 농도를 정략적으로 측정하기 위해서는 농도를 알고 있는 DNA를 대조구로써 함께 전기 이동한 후 겔의 사진을 찍고 band의 밀도를 densitometer로 읽는다. 대조구 DNA의 농도와 측정된 밀도 사이의 표준곡선을, 그리고 샘플 band의 밀도에 해당되는 DNA 농도를 내삽(intapolation)으로 얻기도 한다.

키워드

RNA,   RNA분리,   전기영동,   단백질 전기영동,   단백질 분리,   RNA분리