(생화학 실험레포트) DNA 클로닝

소개글

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목차

1. 실험일자
2. 실험목적
3. 서론
(1) PCR
(2) DNA 클로닝
(3) Plasmid preparation
(4) 전기영동
4. 실험과정
(1) PCR
(2) Ligation
(3) Transformation & seeding
(4) Plasmid preparation
(5) 전기영동
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

4. 실험과정
(1) PCR
(2) Ligation
(3) Transformation & seeding
- ① Ligation 시킨 반응물 5 ㎕를 Top 10 competent cell에 첨가한다.
② 얼음에 5분간 방치한다.
③ 42℃에서 30초간 heat-shock 시키고 즉시 얼음에 1~2분간 둔다.
④ SOC 배지 200 ㎕를 가하고 37도 incubator에 10분간 흔들면서(200rpm) 방치한다.
⑤ 배양기에 방치하는 동안 LB agar plate(+amp 100㎍/ml)에 X-gal(20 ㎍/㎕) 80 ㎕와 100 mM IPTG 20 ㎕를 멸균 된 spreader를 사용하여 골고루 펴 바른다...
(4) Plasmid preparation
(5) 전기영동

6. 고찰
- 우선 PCR product는 그 본래 크기가 약 1.6kbp이므로 1kbp~2kbp 사이에서 관측되는 것은 정상적인 결과이다.
Plasmid의 경우는 원래 정상적인 크기는 (1.6kbp + 3.9kbp)로 약 5.5kbp이다. 하지만 실험결과상에서는 2kbp~3kbp사이에서 관측되었다. Plasmid는 원형DNA라서 선형DNA에 비해 더 빠르게 떨어지는 경향이 있는데 이것으로 인한 결과로 추정된다. 그리고 plasmid를 전기영동 시킨 것을 보면 6kbp위로 잔상들이 보이는데 이것은 박테리아 DNA가 첨가되어 들어간 것으로 추정된다.
E1과 E2를 분석하면 다음과 같다.
우선 ligation이 일어날 때 PCR product는 정방향과 역방향 두 방향으로 모두 삽입될 수 있다. 그런데 hindIII와 같은 제한효소를 처리하게 되면 어느 방향으로 ligation이 되었는지에 따라 잘리는 양상이 다르다....

키워드

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