[일반화학실험] 크로마토그래피(Chromatography)

소개글

[일반화학실험] 크로마토그래피(Chromatography)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

<결과레포트>
1. Abstract & Introduction
2. Data & Results
3. Discussion
4. Reference

<예비보고서>
1. 목적과 원리
2. 시약 조사 및 실험 기구
3. 실험 과정
4. 관찰 및 자료

본문내용

피 종이를 맨손으로 만져서는 안 된다. 실험할 때 반드시 폴리 글러브를 끼고 하도록 한다.
1. 크로마토그래피 종이의 위쪽 끝에서 1.5cm되는 곳을 접은 다음, 아래로부터 1cm 되는 곳에 연필로 선을 긋는다. 종이의 옆선과는 0.5cm, 점과 점 사이는 1cm가 되도록 두 점을 역시 연필로 표시한다. 이와 같은 방법으로 모두 8장을 준비한다. 각 점에는 무엇을 전개시킬 것인지 연필로 써 두는 것이 좋다. (볼펜, 싸인펜, 네임펜 등을 사용하지 말 것.)
2. 모세관으로 아미노산 혼합 용액을 빨아 들인 후, 1에서 준비한 종이의 한 점에 가볍게 찍는다. 이 때 sample spot이 1mm가 넘지 않도록 주의한다.모세관에 남은 용액을 거름 종이(또는 휴지)로 뽑아내고, 증류수(또는 아세톤)로 서너 차례 헹구어준다. (이 때, 모세관을 부러뜨리지 않도록 주의 할 것.)
3. 20mM Ala, Asp, His 용액도 위와 같은 방법으로 종이 위에 올린 후, 완전히 말린다.
4. 2 - 3의 과정을 3번 더 반복하여 총 8장의 종이를 만든다. 하나의 용액을 사용하는 모세관으로 다른 종이에 spotting을 마친 후에 다른 용액으로 넘어가는 것이 편하다.
5. 500mL 비커 하나에 첫 번째 전개 용매 10ml를 넣는다. 다음 비커에는 두 번째 전개 용매 10ml를 넣는 등 같은 식으로 비커 4개를 준비한다.
6. 앞에서 준비한 종이 한 쌍을 스테플러 또는 셀로판 테이프를 사용하여 끈에 부착하고, 비커의 바닥에 깔린 전개액에 종이의 끝을 담근다. 이 때, 전개 시작점 위로 용매가 튀지 않도록 주의 한다. 종이가 수직으로 설 정도로 끈의 장력을 맞춘 후, 테이프로 끈의 양쪽을 비커의 바깥면에 고정시킨다. 랩으로 비커의 위 부분을 완전히 밀페한 후, 70분 동안 전개시킨다.
7. 70분 후에 종이를 꺼내는데, 꺼내자마자 용매가 전개된 제일 끝 부분(solvent front)을 연필로 표시한다. 그 다음 이 종이를 110℃의 오븐에서 10분간 놓아두거나, 머리 건조기를 사용하여 완전히 건조시킨다.
8. 완전히 건조된 종이에 닌히드린 용액을 분무기를 사용하여 뿌려준다. 이 과정은 후드에서 실행하며 되도록 조교가 다루도록 한다. 닌히드린은 손에 묻으면 어지간해서는 지워지지 않으므로 주의할 것.
9. 닌히드린 용액을 뿌린 종이들을 7과 같은 방법으로 완전히 건조시킨 후, 발색 반응으로 나타난 점들의 위치를 측정하여 Rf값을 계산한다. 특히 염산 전개액은 발색 반응이 나타나는 데까지 꽤 시간이 걸리므로 종이를 집에 가져가서 Rf 값을 측정하여도 좋다. (완전히 건조시킨 후, 색깔이 뚜렷하게 나타나지 않으면, 다시 한번 닌히드린 용액을 뿌려준다.)
실험 B. 역상 크로마토그래피에 의한 식용 색소의 분리
1. C-18카트리지를 주사기에 끼우고 노랑, 빨강, 파랑색소의 혼합용액(적색40호, 황색5호,청색1호 식용색소) 한방울을 카트리지 위쪽에 넣은 후 약 3ml의 물을 주사기에 채우고 서서히 약한 압력을 가해 세가지 색소가 분리되는 것을 관찰하고 이들 색소를 극성이 큰 것부터 작은 것 순서로 나열한다.
2. 주사기 위쪽에 남아있는 물을 버리고, 30% 메탄올 3ml정도를 채운후 압력을 가하여 흘려주면서 카트리지에 남아있는 색소가 어떻게 움직이는가를 관찰한다. 카트리지를 사용한 후에는 100% 메탄올 3ml로 카트리지를 씻어내고, 3ml의 물로 다시 씻어낸 후에 다시 사용한다.
(4) 관찰 및 자료
(Rf 값 채워 넣기)
전개 용매
혼합물
Ala
Asp
His
에탄올/물(4:1)
n-프로판올/물(4:1)
n-프로판올/0.1 N HCl (4:1)
n-프로판올/2% NH3 (4:1)

키워드

크로마토그래피,   Chromatography,   아미노산,   알라닌,   히스티닌,   pH,   닌히드린