단백질 분리

소개글

단백질 분리에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. SDS-PAGE(Sodium dodecylsulfate polyacrylamide)
◆ 단백질 분리
◆ SDS-PAGE의 원리
◆ 단백질의 염색

2. Western Blotting

3. 참고 문헌

본문내용

이용한 항원 단백질의 검출방법을 나타내었다. 단백질을 전사시킨 membrane은 항체와의 비특이적 흡착을 방지하기 위하여 blocking처리를 한다. Blocking은 여러 가지 용액이 이용되지만 최초의 선택으로서는 1~3%의 BSA나 gelatin을 함유한 Tween-PBS나 단순한 Tween-PBS가 적당하다. 비특이적 흡착은 주로 소수성으로 상호작용에 의한 것으로 생각되어지지만 Tween과 같은 계면 활성제는 membrane의 소수성의 부분에 흡착하고 이것을 효과적으로 block 할 수 있다는 장점이 있다.
Blocking이 끝나면 일차 항원과 반응시킨다. 이때 항체의 농도가 높으면 관계없는 단백질과 비특이적으로 반응하기도 하고 membrane 전체가 검게 나타날 수 있다. 역으로 너무 낮으면 검출되지 않을 수도 있다.
이 다음에 이차 항체를 결합시키는데 이차 항체는 주로 HRP나 AP 표시한 제품으로 시판되어지고 있는 항체를 사용한다.
HRP나 AP는 조건에 따라 발색할 수 있는 것으로 단백질이 있다고 색으로 나타내어준다.
3. 참고 문헌
- 연세대학교 의과대학 분자생물학 실험실
- 단백질실험노트, 월드사이언스,2001.9.1, 김승호 외 공역

키워드

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