황색 포도상 구균(S.aureus) 동정

소개글

황색 포도상 구균(S.aureus) 동정에 대한 보고서 자료입니다.

목차

실험 목적
실험 재료
실험 과정
즁요 진단법의 목적
결과 - 배지 사진과 스케치
결과표 작성
고찰

Catalase Test
O-F Test
MSA
Staph NO.110
DNase
BAP
Oxacillin resistance

본문내용

적
DNase 생성유무 관찰
임상세균에서 병원성 포도상 구균의 동정하기 위한 보완 검사를 한다.
실
험
원
리
1.배양된 균의 분해 여부에 따라 균주를 분리
2.DNA 분해효소 - DNase 생성 유무를 시약반응 과정을 통해 판독한다.
3.Toluidine blue가 배지에 포함되어 있으면 DNA 가수분해 되어 Pink color가 나타난다.
색소가 첨가되지 않는 배지에서는 1N HCl을 떨어 뜨려 DNase 생성 유무를 판독한다.
실
험
방
법
1.18-24시간 배양된 순수배양균주를 백금이로 균을 채취하여 DNase 배지에 직선으로 접종한다.
이때 배지에 수개의 균주를 할 수 있다.
2.백금이로 균을 채취하여 직경이 약 5mm 되도록 점상으로 접종한다.
3.35도에서 18-24시간 배양한다. 필요에 따라 36시간 배양도 가능하다.
4.발육이 잘된 접종부위에 1N HCl 용액 / Toluidine blue을 떨어 뜨린다.
DNase Medium상의 colony + 1% Toluidine blue
1N HCl
<<결과판독>>
양성 : 1% Toluidine blue 적하 - Colony 주변 Pink
1N HCl 적하 - Colony 주변 clear(투명대 형성)
음성 : 반응 없음
실
험
결
과
S.aureus 와 MRSA : 양성반응 - DNAse 생성
S.aureus
S.epidermidis
Micrococcus
MRSA
DNase
1N HCl
양성
음성
음성
양성
Toluidine
핑크
반응 없음
반응 없음
핑크
양성
음성
음성
양성
고
찰
DNase검사는 임상세균에서 병원성 포도상 구균의 동정 절차였다.
Mannitol 시험에서 양성 / Bound coagulase 음성의 경우 이 균이 Staphylococcus.aureus 인지 아닌지??를
판단할 때 하는 실험이 바로 DNase 검사인 것이다.
Tube test는 너무 번거롭기 때문에 대신으로 이 검사를 한다고 한다.
배지와 1N HCl용액과의 반응은 쉽게 판독이 되었는데, Toluidine 용액과 반응시켰을 때 처음에는 색 변화가 없 었고 좀 더 많은 양을 배지에 떨어뜨렸을 때 핑크빛을 볼 수 있었다.
BAP
용혈(Hemolysis)능 관찰
실험
목적
세균이 혈액한천배지(blood agar)에서 보여주는 성상(용혈대와 집락)을 관찰하여 균을 동정한다.
실
험
원
리
세균이 혈액한천배지에서 용혈하는 성상에 따라 3가지 종류로 분류한다.
적혈구의 용해와 관계된 것으로 적혈구의 용해 정도에 따라 부분, 완전 및 비 용혈 등으로 구분한다.
1.용해 또는 용혈(Hemolysis) : 세균의 적혈구 용해효소(Hemolysis)의 작용
2.용혈 (Hemolysis)
①α 용혈(불완전용혈) : BAP내의 RBC를 파괴하여 집락주위에 녹색 용혈환 형성.
철분을 함유한 혈색소의 부분적인 용해
②β 용혈(완전용혈) : BAP내의 RBC를 파괴하여 집락주위에 Clear한 용혈환
③γ 용혈(비 용혈) : 용혈현상 없음
α 용혈(불완전용혈)
β 용혈(완전용혈)
γ 용혈(비용혈)
집락주변의 적혈구가
부분적으로 용해
집락주변의 적혈구가 완전히 용해
집락주변의 적혈구의
변화가 전혀 없음
녹색
Clear
용혈현상 없음
실
험
방
법
1.배정 받은 균주를 혈액한천에 도말접종(blood agar streak)한다.
2.37도에서 24-48시간 배양한다.
3.용혈대와 집락을 주위 깊게 관찰하여 스케치 한다.
*용혈대 관찰법
뒷면을 불빛에 비춰 보면 쉽게 알 수 있으며 적혈구 용해 정도에 따라 3가지로 분류한다.
*집락 관찰법
크기 모양 높이 가장자리 색깔 표면 투명도 경도 등을 중심으로 관찰한다.
실
험
결
과
S.aureus
S.epidermidis
Micrococcus
MRSA
배
지
뒷
면
균종
황색포도상 구균
표피포도상 구균
황색 색소균
용혈능
β 용혈(완전용혈)
γ 용혈(비용혈)
γ 용혈(비용혈)
β 용혈(완전용혈)
색소
황금색
백색광택
엶은 황색
황금색
고
찰
용혈성 관찰에서 S.aureus / MRSA 는 완전 용혈성이었으며, 집락의 색도 황금색으로 혈액 한천 배지상에서
충분히 구분이 가능했다.
표면접종한 배지 상에서는 균수가 적어지면서 독립된 집락의 수가 증가하여야 하며, 균종에 따라 집락의 차이점 을 가져서 이의 관찰을 통한 균종을 추정할 수 있어야 한다.
그러나 배양된 배지에서 독립된 집락을 관찰 하지 못했다. 배지 표면에 도말접종(streaking)시 너무 많은 균을 묻힌 것이 문제 인 듯 하다.
Oxacillin resistance
항생제 감수성 시험
실험
목적
MRSA 여부를 알기 위하여 Oxacillin disk를 이용한 Methicillin 내성검사를 한다.
실
험
원
리
및
과
정
1.Methicillin 은 체내에서는 반응이 좋으나 시험관에서는 좋은 결과를 볼 수 없다.
그래서 체내와 시험관에서의 약효가 좋은 Oxacillin을 Methicillin 대신 사용하여 판독한다.
2.이 과정은 S.aureus 균의 항생제 감수성 시험이다.
3.Oxacillin disk
①혈액한천배지(BAP)위에 MRSA와 S.aureus균의 집락을 백금이로 빈틈없이 전면 도말한다.
②적당한 위치에 직경 6mm인 Oxacillin disk를 올려 놓고 가볍게 누른다.
③Disk가 배지에 완전히 부착되면 배지를 뒤집은 위치로 배양한다.
④clear zone을 mm로 표시 : OX직경을 합한 전체 직경을 측정하여 항생제 감수성을 판독한다.
수치
BAP 배지
판정
치료 가능성
Oxacillin ≥ 10mm
R(내성)
균 못잡음
치료 어려움
Oxacillin ≥ 13mm
S(감수성)
균 치료
<<결과판독>>
실
험
결
과
S.aureus
MRSA
O disk 주변에 13mm 이상
발육이 억제
10mm 이하로 발육이 억제됨
S (감수성)
R(내성)
고
찰
S.aureus 는 Oxacillin disk 주변에 발육이 억제된 것을 관찰할 수 있었다.(≥ 13mm)
S.aureus에 감염되었을 때 항생제로 Oxacillin을 선택하여 균을 잡는 치료제로 사용 가능하다.
MRSA 균은 Oxacillin에 내성이 있음을 알게 되었다.

키워드

황색 포도상 구균,   S.aureus,   Micrococcus,   BAP 용혈능,   MSA, Staph No 110,   O-F DNase,   Coagulase Catalase,   항생제