단백질 분리정제: column chromatography

소개글

단백질 분리정제: column chromatography에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Date
　
2. Subject
　
3. Object
　
4. Introduction
　① 크로마토그래피 (Chromatography)
　② Ion-exchange chromatography
　③ 단백질 정량법 (Bradford assay)
　
5. Materials & Apparatus
　※ Coomassie Blue G dye
　※ BSA(bovine serum albumin)
　
6. Methods
　※ 주의사항
　
7. Results
　
8. Discussion
　
9. Reference

본문내용

1. Date
7 April 2006
2. Subject
단백질 분리정제: column chromatography
3. Object
Chromatography에 대한 개념을 익히고, 미리 만들어진 Buffer 용액과 DEAE sepharose anion exchange chromatography를 이용하여 단백질을 분리정제 한다. 또한 분리정제 된 결과를 ELISA에 넣어 수치를 파악하고 이러한 결과 분석을 다음 실험의 결과를 예측한다.
4. Introduction
① Chromatography
크로마토그래피(chromatography)란 다공성 흡착제 입자를 일정한 길이만큼 충전시킨 관(column)에 분리하려는 용질이 들어 있는 혼합물을 통과시켜 흡착제 입자에 대한 용질의 흡착 특성 차이에 근거하여 분리하는 방법이다. 즉, 시간이 지나면서 흡착제에 잘 흡착되지 않는 용질은 관의 멀리까지 이동하고 쉽게 흡착되는 용질은 이동하는 속도가 느리다.
크로마토그래피 공정은 이동상(moving phase)과 고정상(stationary phase)으로 이루어 진다. 고정상은 흡착제, 이온교환수지, 다공성 물질, 또는 겔 등이며, 이들은 원통형 관에 충진되어 있다. 이동상에는 분리하려는 용질이 포함된 용액과 용액을 고정상으로 운반하는 용출액이 있다. 시료성분은 고정상과 이동상으로 분배(partition)를 반복하면서 고정상 내를 이동하는데 각 성분에 따라 그 분배의 비율이 다르고, 고정상 내의 이동속도에 차이가 생겨 각 성분은 분리된다. 이동상의 종류에 따라 가스 혹은 액체 크로마토그래피로 분류된다. 가스 크로마토그래피는 열적으로 안정된 휘발성 물질에 대한 분리 기능이 높고, 고감도이고, 빠르고, 간편하지만 비 휘발성 물질의 분석에는 직접 적용할 수 없기 때문에 생물공정에서 얻어지는 생성물을 분리정제 하는 데는 유용하지 않다. 그러나 액체 크로마토그래피는 적당한 용매에 용해되는 비 휘발성 물질의 분석에 적합하다. 크로마토그래피는 다성분 혼합시료의 분리와 분석에 특히 위력을 발휘한다.
이온교환과 친화성 크로마토그래피는 단백질과 다른 생물분자를 분리하는 데 가장 널리 사용되는 크로마토그래피 법이며, 이외에도 흡착 크로마토그래피(adsorption chromato-graphy), 액-액 분배 크로마토그래피(liquid-liquid partition chromatography), 소수성 상호반응 크로마토그래피(hydrophobic interaction chromatography), 종이 크로마토그래피(paper chromatography), 얇은 막 크로마토그래피(thin layer chromatography) 등이 있다.
② Ion-exchange chromatography
이온교환 chromatography(ion-exchange chromatography)는 column chromatography의 한 종류로 gel 여과 chromatography와 병행한 일반적인 정제방법이며, 가용성 단백질의 대부분에 걸쳐 적용이 가능하다.
이온교환 크로마토그래피의 정지상은 다양한 종류의 기능기가 부착된 지지체인 이온교환수지이다 (표 1 참고). 이동상에 있는 반대 전하를 띤 용질은 정전기적 인력 때문에 정지상에 이끌린다. 음이온 교환수지에는 양으로 대전된 기능기(예:트리에틸아미노에틸, 디에틸아미노에틸 등)가 지지체에 공유결합으로 붙어 있으며 양이온 교환수지는 음으로 대전된 기능기(예:술포메틸, 카르복시메틸 등)가 결합되어 있다. 지지체로 사용되는 물질로서는 폴리스티렌(polystrene), 폴리아크릴레이트(polyacrylate), 셀룰로오스, 세파셀(Sephacel), 덱스트란, 아가로오스, 토요펄(Toyopearl) 등이 있다.

키워드

단백질,   크로마토그래피,   분리정제,   coomassie blue g,   BSA,   정량,   이온교환,   실험