Western blot과 전기 영동

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Western blot과 전기 영동에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

차 구조를 완전히 깨서 1차 구조로 만든 다음에 시행하기 때문에 단백질 고유의 기능을 연구하는 데에는 많은 문제가 있다. 그래서 이러한 native gel을 사용한다. 여기에는 SDS는 들어가지 않으며, 이 방법을 쓸 때 중요한 것은 이온의 농도, 겔과 버퍼의 pH 등이 잘 맞아야 한다는 점이다. non SDS-PAGE를 이용해서 전기영동을 하게 되면 단백질이 제 구조를 유지하고 있기 때문에 특징적인 기능을 알아볼 때 유용한 방법이다.
3) 내용
단백질이 자신의 접힌 형태를 유지하기 때문에 단백질의 유체 운동의 크기와 이동성이 겔에서 그 형태의 성질에 따라 매우 다양할 것이다. (더 많이 빽빽한 형태에 있어서 이동도가 높을수록, 올리고대(중합체)와 같은 더 큰 구조들에 있어서 더 낮아진다.) 만약 native PAGE가 산성 혹은 알칼리 변성을 피하고 중성 pH에 가까이서 수행한다면, 그것은 형태, 자가 집합, 그리고 다른 단백질이나 화합물의 결합을 연구하는 데 사용될 수 있을 것이다. 따라서 native gel은 전하 또는 단백질의 형태를 선택하는 모든 (어떤) 과정에서 민감할 수 있다. 이것은 native gel을 다음과 같은 것을 검출하기 위한 훌륭한 도구로 만든다:
- 화학적 감소에 의한 전하의 변화 (ex) deamidation)
- 접혀지지 않은, “molten globule", 또는 다른 변형된 형태들
- 유기 배당체들과 집합체 (공유 또는 비공유)
- 결합의 경우 (단백질-단백질 또는 단백질-리간드)
다른 성질들, 그리고 그들의 상대적으로 높은 통과율은 native gel을 가속화된 안정성 시료로 분석하기 위한 훌륭한 도구로, 다른 과정들의 비교를 증명하기 위한 또는 excipients의 효과를 시험하기 위한 훌륭한 도구로 만든다. native gel의 다른 이점은 분리 후에 그들의 자연 상태 안에서 단백질을 회복시키는 것이 가능하다는 점이다. 활성화된 생물학적 재료의 회복은, 그러나 어떤 고정 또는 염색보다 먼저 행해질 필요가 있는지도 모른다.
Alliance 단백질 연구소에서, 우리는 native gel이 상업적으로 precast 된 젤 그리고 필요로 하는 buffer의 변화와 함께 시작하는 산성과 염기서 둘 다의 단백질 상에서 흐른다는 것을 알았다.
< 참고 문헌 >
프로테오믹스, 범문사, 주현.한진 저단백질 실험노트(上), 김승호, 월드사이언스최신 생화학, 김을상 外 6명, 신광문화사

키워드

Western blot,   Southern blot,   Northern blot,   non SDS-PAGE,   정량분석