Dipeptide의 아미노산 서열 결정 실험 자료

소개글

Dipeptide의 아미노산 서열 결정 실험 자료에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험제목

2. 실험날짜

3. 제출자 및 공동실험자

4. 실험목적

5. 실험원리

6. 시약 및 기자재

7. 실험방법

8. 결과

9. 고찰

10. 참고문헌

11. Further study

본문내용

분석이 가능하다는 데 있다. 특수한 경우에는 10-9g까지 검출이 가능하지만 보통은 500㎍정도는 써야 된다.
지지체(support)는 유리를 사용하고, 정지상은 silica 또는 alumina같은 흡착물질을 사용하고, 이동상은 모세관 작용을 이용한다.
ⅱ) N-terminal sequence의 reagent와 N-terminal sequence의 방법
FDNB, Dansyl-Cl, PITC의 방법이 있다.
FDNB법(1-fluoro-2,4-dinitrobenzene)은 1945년 Sanger가 개발한 가장 고전적인 방법으로 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene(FDNB)은 pH 8∼9, 실온 조건하에서 peptide의 아미노기와 반응하는 것을 이용한다. Dinitrophenyl화한 peptide를 6N-HCl로 105℃에서 16시간 가수분해하면 N-말단 아미노산은 α-아미노기가 dinitrophenyl화한 유도체가 된다. Arginine 외의 N-dinitrophenyl 아미노산은 에테르로 추출할 수 있고 종이 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피 등으로 표준 물질과 비교 확인할 수 있다.
Dansyl chloride법은 FDNB법과 마찬가지로 N-말단 아미노기를 표지 분자와 반응시키고 가수분해한 후 표지 분자가 붙은 아미노산유도체를 검출하여 확인하는 방법으로 밑의 그림에 나타내었다. Dansyl chloride를 peptide의 N-말단 아미노기와 반응시켜 sulfonamide 결합을 만든다. Sulfonamide 결합은 산 가수분해에 안정하므로 dansyl화 peptide의 가수분해물 중에서 N-dansyl 아미노산을 분리, 동정한다. N-dansyl 아미노산은 자외선을 조사하면 형광을 내므로 10-10∼10-9mol에서 검출할 수 있다.
PTC(phenylisothiocyanate)법은 Edman법이라고도 하며 그 반응을 밑의 그림에 나타내었다. Phenylisothiocyanate(PTC)를 pH 8∼9, 실온에서 peptide와 반응시키면 N-말단이 thiocarbamyl화 된 PTC-peptide가 얻어진다. 이것을 산성조건하, 예를 들어 trifluoroacetate()와 반응시키면 N-말단 아미노산만 thiazoline 유도체로서 유리하고 나머지의 단백질부분은 분해하지 않고 남는다. Thiazoline 유도체는 이어서 환상구조를 만들어 PTH(phenylthiohydantoin)가 된다. PTH 아미노산은 ethylacetate로 추출하여 각종 크로마토그래피로 동정할 수 있다. 미분해로 남은 peptide 또는 단백질은 계속해서 다음의 N-말단 동정에 사용할 수 있다. 최근에는 이 일련의 반응을 자동화한 장치(peptide sequencer)도 시판되고 있으며 조건이 맞으면 N-말단으로부터 60 아미노산잔기 정도는 단기간에 배열을 결정할 수 있다.
ⅲ) amino acid의 side chain에 ring이 있는 경우 어떤 결과를 가져올까?
FDNB는 중성과 알카리에서 20개의 아미노산, 펩타이드 N-terminal의 amino group, lysine의 side chain의 ε-amino group, histidine의 imidazole group, tyrosine의 phenol group와 반응하여 DNP-amino acid를 형성한다. 이 때 lysine의 side chain의 ε-amino group, histidine의 imidazole group, tyrosine의 phenol group와 반응한 경우 FDNB가 α-carbon의 amino group와 반응하지 않을 수 있으므로 아미노산의 염기서열을 결정할 수 없다.

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