[결과보고서] HPLC

목차

1. Glucose와 Arabinose의 standard curve 구하기.
2. 각 시료의 체류시간을 확인.(시료 4번)
3. 1의 standard curve 및 2의 체류시간을 이용하여 각 unknown sample들의 실제 농도를 추정.
4. Glucose와 Arabinose의 RT (retention time)이 왜 다른지 생각해 보자.
5. 고찰

본문내용

본다면 Arabinose가 더 빨랐겠지만 둘의 분자량의 차이는 매우 작은 편이고 용매의 차이에 따라 달라질 수 있다. Arabinose는 물에 녹을 수 있지만 glucose는 물에 녹지 않기 때문에 용매에 차이에 따라서 달아졌을 것이다.
5. 고찰
이번 실험은 HPLC라는 고가의 장비를 이용하여 당을 정량분석하는 실험이었다. 실험 자체의 어려움은 없었다. 샘플시료를 채취하고 원심분리 후 필터링을 거쳐 셀을 제거한 배지를 얻고 HPLC에서 RI검출기를 이용해 두 가지 당의 정량을 분석했다. 실험의 어려움보다는 기다려야하는 지루함이 더 컸던 실험이었다.
필터링연습을 하고 기기를 사용해보기 위해 앞 조가 끝나기를 기다렸다가 순서가 되어 조교님의 설명을 듣고 시작했다. injection을 하기 전에 증류수로 3번가량 세척을 하고 시료로 다시 한번 세척을 하고 기기안의 컬럼이 망가지는 것을 방지하고 정확한 데이터를 얻기 위해 버블을 없앤다. 30μl이상을 주입하는데 레버를 주사기를 꽂고 레버를 왼쪽으로 돌려 주입구를 열고 빠르게 주입후에 닫아주었다. 그리고 분석이 되기를 기다린 뒤에 결과를 얻고 결과 값을 분석하면 실험은 끝나는 것이었다. 장비가 많은 부분을 처리해 주기 때문에 직접적으로 실험에 있어 어려움은 없었다.
내가 한 샘플은 4번으로 미지의 시료를 분석한 결과 60%의 Glucose와 40%의 Arabinose가 나왔다. 이 역시도 표준시료와 비교하여 데이터를 분석하면 되는 것으로 면적과 RT값을 비교하여 짐작할 수 있었고, 결과 역시 예상대로 나왔다.
실험을 하면서 고생하신 조교분들께 감사드린다.

키워드

hplc,   액체크로마토그래피,   Glucose와 Arabinose의 standard curve,   생명공학실험