[생화학실험] RNA polymerase 분리 정제

목차

<Method>

1. Cell lysis
2. Cell Purification


<각각의 시약과 buffer의 역할 및 작용 원리>

① PMSF
② Leupeptin
③ Sodium deoxycholate
④ Ammonium sulfate
⑤ PEI
PEI는 많
⑥ Sephadex


<Result>


<Discussion>


<Reference>

본문내용

rker를 기준으로 72-93kDa의 band 사이에 존재하므로 약 82kDa정도라고 확인할 수 있다. Lysate의 경우 T7 RNA polymerase 뿐만 아니라 다른 여러 가지 물질이 섞여 있는 것이 보인다. loading한 것에서도 T7 RNA polymerase 보이는데 원래는 resin에 단백질이 붙어서 band가 나오지 않아야 하는데 이 때 이미 buffer을 따라 나와서인지, 원래 band가 나와야할 Elution buffer에서 band가 형성되지 않음이 보였다. 이는 우리가 pH를 확인하지 않아 잘 모르겠지만 단백질이 충분히 (+)charge를 띠고 있지 않았을 수도 있고, 조심스럽게 하여 겉으로 보았을 때 resin이 괜찮다고 생각하였으나, buffer을 내리는 과정에서 망가졌을 가능성도 있다.

김승호 외 1명 / 단백질 실험 노트 (상)/ 월드 사이언스/ 1998/ p30～31
Frank B. Armstrong / 생화학 / 청문각 / 1992 / p.72
한국생물공학회 / 생물공학실험서 / 자유아카데미 / 2000 / p.28
조덕재 / 식품분석(이론과 실습) / 지구문화사 / 1990 / p 96~10

키워드

생화학실험,   RNA,   분리 정제,   polymerase,   RNA polymerase ,   생화학