동물조직에서 RNA의 분리방법

소개글

동물조직에서 RNA의 분리방법에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

Part I. Total RNA Isolation from Animal Tissue
#조직으로부터 RNA를 isolation하거나 RNA quality가 떨어지는 경우는 RNAlater와 같은 RNA stabilization 용액을 반드시 사용한다.
Materials
Ice, RNeasy kit, RNA stabilizing solution, Trizol, Liquid nitrogen, Mortar and pestle-mercaptoethanol, Syringe and needles(19-20G), Chloroform, 75% EtOH, RNase-free Water, Micro원심분리기, Razor blade, Isopropanol
1. RNA stabilization with RNAlater
1) 조직을 0.5cm 보다 얇게 썬다.
(조직이 0.5cm 보다 두꺼우면 RNAlater가 스며드는 시간이 너무 길어 RNA stabilization이 일어나지 않을 수 있다.)
2) 얇게 썬 조직은 신속하게 최소한 10배 이상 부피의 RNAlater에 담가(10ul/1mg of tissue) 4C에서 overnight 동안 보관한다.
3) RNAlater에서 4C, overnight 동안 보관한 조직을 –20C에서 장기간 보관할 경우에는 4C에서 overnight동안 보관한 뒤 RNAlater를 제거하여 –80C로 옮긴다.
2. Isolation of total RNA from animal tissue with Trizol and cleanup with RNeasy mini kit
Kit를 처음 쓰는 경우에는, 4배 부피의 ethanol을 RPE buffer에 더한다.
1) 50-100mg 의 조직을 액체질소에 담가 frozen상태로 만든다. Frozen 상태의 조직은 액체 질소를 막자 사발에 약간씩 부어 가면서 막자를 이용하여 가루가 될 때까지 갈아 부순다. (항상 모든 사용하는 기구들은 액체질소를 이용하여 최저의 온도를 유지한 상태로 실험 과정을 진행한다.)

키워드

DNA RNA extraction,   animal tissue,   RNeasy kit 게놈,   파이펫 원심분리,   elution buffer 분자생물학,   리보뉴클레오티드,   디옥시리보뉴클레오티드,   페놀 genomic DNA