본문내용
된다. Alkali (NaOH)를 이용하기 때문에 Alkali lysis라고 한다.
□ Sol 3 : 사용한 Alkali를 중성 pH로 neutralizatiojn한다. 또한 potassium acetate가 chromosomal DNA를 침전시킨다.
□ Washing solution : Plasmid DNA에 포함된 salt들을 제거한다.
6) Solution 2와 3에서 vortexing하지 않고 thoroughly inverting한 이유는 size가 큰 chromosomal DNA가 fragmentation되어 원하는 plasmid와 같이 섞여 나오는 것을 방지하기 위함이다.
7) 각 enzyme마다 active한 온도가 다르기 때문에 이를 통제하기 위해 모든 enzyme reaction은 ice에서 진행하였다.
7. 참고문헌
1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
2) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.
3) http://en.wikipedia.org/wiki/
4) http://100.naver.com
8. Further study
1) CMV/ T7/ Sp6 / SV40 promoter에 대하여 간단히 쓰시오.
→ CMV / T7 / Sp6 / SV40 promoter는 모두 viral promoter이다. Vector의 조건(Origin of replication, Selection marker, promoter, multicloning site)중 하나인 promoter에 포함되는데, vector가 virus의 plasmid이기 때문에 cloning한 DNA를 발현시켜 단백질을 얻기 위해 viral promoter인 CMV / T7 / Sp6 / SV40 promoter를 사용하는 것이다.
2) Restriction Enzyme이 Star activity(비특이적 활성)을 일으킬 수 있는 조건을 생각해보고 이를 억제하기 위한 방법을 쓰시오.
→ Star activity란 제한효소가 본래의 인식서열과 다른 염기서열을 비특이적으로 분해하는 활성을 뜻한다. Star activity를 나타내는 조건으로는 높은 glycerol 농도 및 효소마다 다른 buffer solution의 문제(pH, salt)등을 들 수 있다. 따라서 star activity를 억제하려면 제한효소마다 각각 다르긴 하지만 낮은 glycerol 농도, 중성 pH, 높은 염 농도 상태 등으로 극복할 수 있다.
3) Cloning과 Subcloning에 대해 간단히 조사하시오.
□ Cloning은 동일한 DNA fragment나 cell, organism을 생산해내는 과정을 뜻한다. 우리가 실험에 사용한 cloning은 molecular cloning으로서 지정된 DNA fragment를 증폭시키는 과정을 말하는데 지정된 DNA는 whole gene을 포함하거나 promoter, non-coding sequence, 그리고 randomly fragmented DNA등을 포함한다. Cloning은 genetic fingerprinting에서부터 large scale protein production을 이르는 많은 분야에서 사용된다. 또한, Cloning은 bacteria, insect, plant에서 무성생식으로 유전적으로 동일한 개체가 증식하는 현상을 뜻하기도 한다.
□ Subcloning이란 특정 gene의 역할을 알아보기 위해 cloning한 parent vector로부터 넣었던 gene을 destination vector로 옮기는 과정을 말한다.
□ Sol 3 : 사용한 Alkali를 중성 pH로 neutralizatiojn한다. 또한 potassium acetate가 chromosomal DNA를 침전시킨다.
□ Washing solution : Plasmid DNA에 포함된 salt들을 제거한다.
6) Solution 2와 3에서 vortexing하지 않고 thoroughly inverting한 이유는 size가 큰 chromosomal DNA가 fragmentation되어 원하는 plasmid와 같이 섞여 나오는 것을 방지하기 위함이다.
7) 각 enzyme마다 active한 온도가 다르기 때문에 이를 통제하기 위해 모든 enzyme reaction은 ice에서 진행하였다.
7. 참고문헌
1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
2) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.
3) http://en.wikipedia.org/wiki/
4) http://100.naver.com
8. Further study
1) CMV/ T7/ Sp6 / SV40 promoter에 대하여 간단히 쓰시오.
→ CMV / T7 / Sp6 / SV40 promoter는 모두 viral promoter이다. Vector의 조건(Origin of replication, Selection marker, promoter, multicloning site)중 하나인 promoter에 포함되는데, vector가 virus의 plasmid이기 때문에 cloning한 DNA를 발현시켜 단백질을 얻기 위해 viral promoter인 CMV / T7 / Sp6 / SV40 promoter를 사용하는 것이다.
2) Restriction Enzyme이 Star activity(비특이적 활성)을 일으킬 수 있는 조건을 생각해보고 이를 억제하기 위한 방법을 쓰시오.
→ Star activity란 제한효소가 본래의 인식서열과 다른 염기서열을 비특이적으로 분해하는 활성을 뜻한다. Star activity를 나타내는 조건으로는 높은 glycerol 농도 및 효소마다 다른 buffer solution의 문제(pH, salt)등을 들 수 있다. 따라서 star activity를 억제하려면 제한효소마다 각각 다르긴 하지만 낮은 glycerol 농도, 중성 pH, 높은 염 농도 상태 등으로 극복할 수 있다.
3) Cloning과 Subcloning에 대해 간단히 조사하시오.
□ Cloning은 동일한 DNA fragment나 cell, organism을 생산해내는 과정을 뜻한다. 우리가 실험에 사용한 cloning은 molecular cloning으로서 지정된 DNA fragment를 증폭시키는 과정을 말하는데 지정된 DNA는 whole gene을 포함하거나 promoter, non-coding sequence, 그리고 randomly fragmented DNA등을 포함한다. Cloning은 genetic fingerprinting에서부터 large scale protein production을 이르는 많은 분야에서 사용된다. 또한, Cloning은 bacteria, insect, plant에서 무성생식으로 유전적으로 동일한 개체가 증식하는 현상을 뜻하기도 한다.
□ Subcloning이란 특정 gene의 역할을 알아보기 위해 cloning한 parent vector로부터 넣었던 gene을 destination vector로 옮기는 과정을 말한다.
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