분리정제 FPLC (결과)

소개글

분리정제 FPLC (결과)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험목적
2. 이론
3. 실험방법
4. 실험결과 및 과제
5. 토의
6. 참고문헌

본문내용

이후에 AutoZero를 눌러 그래프의 영점을 맞춰준다. AutoZero를 이용하면 곡선으로 불안정한 그래프의 영점을 잡아주게 된다. 실험결과 그래프에서 노란색 점선이 영점을 잡아준 선이다. FPLC기계는 3가지로 시료의 흐름을 결정할 수 있는데 Waste, Load, Inject이다. Waste는 시료들이 Pump로부터 시작하여 컬럼을 제외하고 기계 속을 지나게 된다. Load는 컬럼을 지나는 경로이다. Inject는 우리가 Inject하는 시료와 함께 컬럼을 지나 Detector로 가는 경로이다. 처음에 Inject을 해 두면 우리가 원하는 양 이상만 Inject해주면 기계가 원하는 양만큼을 원하는 시간에 이동상과 섞어 이동할 수 있게 해주는데 이때 Inject이 아니라 Load상태로 설정되어있으면 우리가 시료를 Inject해 주어도 컬럼속으로 미지시료가 지나갈 수 없다. 우리가 Inject해야 하는 양은 450L이므로 그 이상만 inject해주면 된다. 이때 사용하는 이동상은 Pump와 Detector, 컬럼을 계속 돌면서 쓰이게 된다. 컴퓨터로 나온 실험결과를 살펴보면 이 각 분자마다 IgG (분자량 160,000) - 36.56, BSA (분자량 67,000) - 42.88, beta-lactogrobulin (분자량 35,000) - 50.18, cytochrome C (분자량 12,400) -57.76, cytidine (분자량 240) - 74.80로 분자량이 큰 물질부터 컬럼으로 빠져나왔다. 이것은 분자량이 큰 물질은 크기가 커서 컬럼에 차있는 정지상의 기공으로 들어갈 수 없기 때문에 컬럼을 통과하는데 시간이 덜 걸리고 분자량이 작은 물질은 크기가 작아서 정지상의 기공속으로 들어갔다가 나오는데 시간이 더 걸리는 것이다. 따라서 분자량 마다 이 차이가 있기 때문에 을 이용하여 어떤 물질인지 구분해 낼 수 있는 정성분석이 가능하다. 이 실험에서는 Standard의 이 미지시료의 과 거의 일치하여 쉽게 어떤 물질인지 찾을 수 있었다. 각 실험마다 이 모두 일치하는 것은 아니다. 이 밀려서 나타날 수도 있다. 따라서 은 실험마다 다르게 나타날 수 있다. 그 이유는 시료가 지나갈 때마다 컬럼을 통과하는 시간의 차이가 생기기 때문이다. 시료들이 컬럼을 통과하는 경로가 항상 같은 것은 아니기 때문에 차이가 나는 것은 당연하다. 또한 컬럼에 사용한 정지상과 시료사이에 흡탈착 차이도 생길 수 있고 정지상의 기공 속으로 들어갔다 나오는 확산속도에도 흐를 때 마다 차이가 생길 것이다. 크로마토그래프로 정성분석뿐만 아니라 정량분석도 가능하다. 우리가 사용한 시료의 Standard는 1mg/ml였다. 이때의 면적값을 알고 있으므로 미지시료의 면적을 알면 몇 mg인지 알 수 있다. 면적이 넓을수록 시료의 양이 많을 것이다. 정확한 값을 알기 위해서는 Standard값이 여러 개가 필요하다. 여러 농도의 Standard를 구하여 그래프를 그리고 검량선을 찾아서 미지시료의 면적을 대입하여 찾아야 정확한 값을 얻을 수 있다. 실험을 할 때는 1개의 Standard만 실험하였기 때문에 Factor를 구하여 간단하게 미지시료의 양을 구하였다. Factor는 Standard값에서 면적과 양을 이용하여 구한 것이다. 실험결과에서는 4개의 시료의 면적만 나와있으므로 Factor는 4개만 구할 수 있다. 하지만 미지시료는 3개이고 모두 Factor를 알 수 있는 시료였다. 따라서 원하는 미지시료의 양을 구할 수 있었다.
6. 참고문헌
Stryer 생화학/Lubert Stryer/광일문화사/1999,2,20/47~52
실험생물학/박원학 외 6명/형설출판사/2000,8,15/43,44

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분리정제,   FPLC,   아미노산,   크로마토그래피