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크로마토그래피를 이용한 색소의 분리(정상 크로마토그래피)
10 mL 주사기, 거름종이, 솜, 피펫, 유리막대
실리카 겔, 전개제(1-부탄올과 NH3 를 6:2로 혼합한 용액)
실험 방법
1. 얇은 층 크로마토그래피에 의한 색소의 분리(정상 크로마토그래피)
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겔이 마르지 않도록 계속 용리액을 서서히 흘려주면서 색소가 분리되는 것을 관찰한다.
● 시약 및 기구
실험A. 얇은 층 크로마토그래피에 의한 색소의 분리(정상 크로마토그래피)
100 mL 비이커, 시계접시, 모세관, TLC 판(폭 4 cm, 높이 6 cm 정도)
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크로마토그래피
- 흡착 혹은 액체-고체 크로마토그래피
- 크기 배제 혹은 겔 크로마토그래피
- 분배 크로마토그래피
4.HPLC의 응용
< 이온교환 크로마토그래피법에 의한 음이온 양이온 분리 >
< 크기-배제 크로마토그래피를 이용한 폐식
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사용하여 측량을 반복해서 실험하면 알 수 있을 것이다. 첫 번째 샘플이 총 주입되는 질량 과 두 번째 질량 이 있다고 가정하면, 어떤 에서 두 개의 몫과 비교하면 다음 두 식이 산출된다.
위 두 식을 합치면
과 같이 나타낼 수 있다.
이러한 결
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여과지를 다룰 때는 맨손으로 하지 않도록 하며, 여과지가 시험관 벽에 닿지 않도록 한다.
원점에 색소 추출액을 찍을 때 여러 번 찍어 진하게 한다.
시험관에 종이 크로마토그래피 용지를 넣을 때 원점이 전개액에 잠기지 않도록 한다.
색소
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크로마토그래피(Chromatography)의 분류
(1) 액체-고체 크로마토그래피(Liquid-Solid Chromatography, LSC)
(2) 액체-액체 크로마토그래피(Liquid-Liquid Chromatography, LLC)
(3) 이온교환 크로마토그래피(Ion-exchange Chromatography, IEC)
(4) 크기배제 크로마토그래피(Si
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크로마토그래피에 올려진 물질이 흡착제와 친화력이 큰(잘 섞이는) 물질이라면 이동이 잘 되지 않을 것.
주로 사용되는 흡착제로는 실리카겔, 알루미나 등.
이동상
-고정상에 올려질 물질을 이동시키기 위한 수단.
-보통 혼합용매를 사용.
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여과 크로마토그래피(G-50)
G-50 gel을 column(2 51 cm)에 충진하여 20nM Tris-Cl, pH 8.0으로 평형시켰 다. 위에 농축된 시료를 싣고 난 후, 같은 완충용액으로 용출 시켰다. 활성이 있는 분획을 모아 동결건조 하였다. 얻어진 시료를 증류수에 용해시켜 60
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크로마토그래피는 정지상이 극성, 이동상이 무극성이다. 이번 실험 역시, 정상 크로마토그래피를 실험한 것이다. 따라서 극성 성분일수록 정지상이 되어, 더 오래 머무르게 되어 시료의 이동속도가 느려진다. 실험을 통해 얻은 전개율(Rf)값을
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후, 그 표지와 특이적으로 상호 작용하는 물질을 resin에 붙여서 그 물질을 정제하는 방법이다. 흔히 많이 사용하는 tag으로는 Myc, His, GST 등을 들 수 있다.
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