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vector와 foreign DNA이 연결시 두 개의 nick을 갖는 open circular form이 형성되는데 이는 host로 transformation된 후 repair system에 의해 수선되어 완전한 원형을 이루게 된다. 4R-1. Cloning vector로서 pBR322와 pUC18 DNA를 이용하였을 경우 재조합 DNA의 선별방법
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isolation(Ammonium acetate 법
2. DNA Restriction (Vector 제작
3. pS44 DNA restriction
4. Electrophoresis
5. PCR (polymerase chain reaction
6. Elution ;Gene clean kitⅢ(Bio101
7. Ligation
8. Competent cell 제조 (DH5α) - CaCl2 법 사용
9. Transformation (Heat shock
10. screen
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DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다. intro..
형질 전환(transformation)
Vector
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DNA를 벡터에 삽입하고 배양하여 선별하는 과정을 거쳐 나중에 목적의 recombinent DNA를 얻을 수 있다.
항상 실험에서도 조금이라도 흐트러지게 실험에 임하면 우리가 원하는 실험의 값과 전혀 틀리게 나오게 된다. 손에는 RNA를 분해하는 효소가
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DNA 재조합 기술
유전물질인 DNA를 생체로부터 분리
분리된 DNA 조각들을 연결, 조작
새로운 Recombinant DNA를 만듬
운반체(vector)에 삽입해 특정 유전자 DNA를 다량으로 만듬 (gene cloning)
특정 유전자를 in vitro에서 조작할 수 있는 분자생물학적 연
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6.2 단백질(Proteins) ------------------------------- 34
6.3 핵 산 --------------------------------------- 39
Ⅲ. Chitosan을 혼입한 spange제조 실험 ------------------ 45
Ⅳ. 결 론 ------------------------------------------47
Ⅴ. 참고 문헌 -------------------------------------49
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vector와 DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1이 아니라 길이, molar 농도를 참고 해서 맞춰야 한다. ligation이 잘 되었는지 확인하기 위해서는 cloning 까지 마쳐야 한다. cloning이 금방 끝나는 것이 아니라 오래 걸린다. 또, 제대로 colony가
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pET 23c vector
http://www.merckbiosciences.com/docs/docs/PROT/TB051.pdf
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