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목차
1. 서 론
2. 실험 방법
2.1. LB Agarose 배지와 LB Broth 제조 및 멸균
2.2. LB-Ampicilin 첨가
2.3. E. coli JM109 (pGEM-T-Easy-DXS, pBlueScript-KS(+)) 접종
2.4. Plasmid 분리
2.5. 제한 효소 절단
2.6. Agarose Gel 제작
2.7. 전기영동 및 DNA 확인
3. 결과
3.1. E. c
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바나나, 브로콜리 DNA 추출 실험에서 DNA 손상으로 인한 한계를 느낌.
이에, PCR과 Cloning, 전기영동 실험을 계획.
블로팅과 유전자치료에 관심을 가지게 됨.
배경지식(
플라스미드란?
벡터란?
왜 플라스미드를 벡터로 가장 많이 이용하는
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영동
1.전기영동...
2. 전하에 미치는 pH의 영향
3. 전기영동의 기법
Method
Subject Small-scale Preparations of Plasmid DNA
Introduction : 플라스미드
DNA 클로닝: 공여체 DNA를 다량 복제하는 것
DNA 재조합 과정
Material
Subject Enzyme treatment
Int
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1. Purpose
2. Introduction
3. Material & Supplies
4. Procedure
◎ Plasmid 분리 실험
◎ Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동
5. Result
◎ Plasmid 분리 실험
◎ Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동
6. Discussion(자필)
7. Refrence
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실험으로서, plasmid preparation method에는 alkali lysis법, boiling법, 효소 분해법 등이 있다.
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 균주를 배양하면, 플라즈미드를 갖고 있는
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전기영동에서 빨리 이동하고 선형구조는 초나선에 비해 표면적이 크므로 늦게 이동하기 때문이다. 본 실험에서는 똑같은 플라스미드 DNA에 제한효소를 처리 한것과 하지 않을 것을 사용하였으므로 같은 크기의 DNA라는 것을 알 수 있고 따라서
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ote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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mid가 가진 항생제 내성을 가질 수 있다. 따라서 항생제 배지에서 키움으로 써 plasmid가 숙주에 잘 들어갔는지 확인할 수 있다. 우리 실험에서 pGEM-T easy vector는 ampicillin에 내성이 있기 때문에 LB agar 배지에 ampicillin을 깔고 conformation된 E. coli들을
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3. 내용
가. 내용 체계
나. 학년별 내용
4. 교수ㆍ학습 방법
가. 학습 지도 계획
나. 자료 준비 및 활용
다. 학습 지도 방법
라. 실험·실습 지도
마. 심화·보충 학습 지도, 과학 교수·학습 지도 지원
5. 평가
Ⅲ. 결론
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