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의 0.05 M KMnO4를 넣고 섞는다.
- 1 volume의 0.25 M HCl를 넣어 섞고 실온에서 6시간 정도 둔다.
- 1 volume의 0.25 M NaOH를 넣고 섞는다.
★ Supercoiled DNA와 linear DNA
대부분의 plasmid는 세포내에서 supercoiled circular DNA로 존재하며 이러한 supercoiling은 plasmid replica
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효소들의 종류
(1) Nuclease
(2) ligase
(3) polymerase
(4) modifying enzyme
(5) topoisomerase
3) 제한효소의 종류와 절단부위
4) 제한효소를 이용한 DNA의 절단시 고려할 사항들
5) 대표적인 DNA절단 제한효소와 절단 인식자리
6) 전기영동(electrophoresis)
(1) 전기영동
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DNA 양으로 계산한 효소 양보다 조금 더 많이 넣어주는 것이 좋다. 필요할 때는 제한효소 처리 중에 조금씩 덜어 전기영동으로 monitor할 수도 있다.
■ 전기영동 ( electrophoresis )
전기영동이란 전기장 안의 전하를 띠는 입자가 양극 또는 음극으
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의해 흡수되는 자외선 방사의 양을 결정함으로써 어떤 화합물의 양을 결정하는 방법
Vector
.재조합 DNA 분자를 구축하기 위해 어떤 유전자를 삽입하여 숙주 생명체에서 복제 가능한 DNA 분자
.[1]재조합 DNA실험에 있어 제한효소 등에 의해 절단
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제한효소는 단일 혹은 이중나선의 DNA에 존재하는 특정 뉴클레오티드 서열을 인지하여 자르는 효소이다. 제한효소는 조성과 필요로 하는 효소 보조인자, 작용하는 서열에 따라 크게 4개의 그룹으로 나눌 수 있다. type1의 경우 제한효소절단부
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의 DNA라도 초나선구조는 표면적이 작기 때문에 전기영동에서 빨리 이동하고 선형구조는 초나선에 비해 표면적이 크므로 늦게 이동하기 때문이다. 본 실험에서는 똑같은 플라스미드 DNA에 제한효소를 처리 한것과 하지 않을 것을 사용하였으
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DNA 기술은 1953년 유전자가 DNA라는 사실과 DNA의 구조가 밝혀지면서 예견될 수가 있었다.
이 재조합 DNA 기술은 박테리오파지와 플라스미드에 관한 연구와 DNA에 작용하는 효소들, 특히 제한효소와 DNA리가아제에 관한 연구 등에 의하여 발견된
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의 연구에 더욱 힘을 실어주고 있다. 사람의 줄기세포는 사람의 DNA와 일치하므로 해당 연구 결과를 인간에게 적용시킬 여지가 높아진다. 앞으로 줄기세포를 이용하여 근육분화에 대한 연구가 활발해 지리라 예상이 된다. 그리하여 기존에 정
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의 연구에 더욱 힘을 실어주고 있다. 사람의 줄기세포는 사람의 DNA와 일치하므로 해당 연구 결과를 인간에게 적용시킬 여지가 높아진다. 앞으로 줄기세포를 이용하여 근육분화에 대한 연구가 활발해 지리라 예상이 된다. 그리하여 기존에 정
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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