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Ⅰ. Introduction.
DNA의 정량작업에 있어서는 세가지의 방법으로 분류할 수가 있다. UV를 이용하는 방법, PCR후에 EtBr을 이용하는 방법, 그리고 light cycle을 이용하는 방법이 있다. 이 세가지에 대해 좀더 알아보도록 하겠다.
1. Optical density.
이 방법
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적으로 풀어지게 한다. 이렇게 풀어진 선형 DNA는 부력밀도가 낮아지고 선형 DNA와 plasmid DNA의 부 력밀도차에 의해 서로 다른 지점에 생성된다. 분리된 순수한 plasmid DNA는 튜브의 옆 면에 구멍을 뚫어서 주사기로 추출할 수 있다. EtBr은 buthanol로
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EtBr을 이용하지 않는 다른 방법들도 존재한다. 어떤 방법들이 있는지 설명하라.
2R-4. Chromosomal DNA와 같이 분자량이 큰 DNA들은 일반적인 Agarose gel에서 분리하기가 힘들다. 이 때 orthogonal field alternation gel electrophoresis (OFAGE)가 사용되는 데 이 전
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에 3ul씩 loading하고 sample의 양옆에는 marker를 3ul씩 loading하여 100V에서 전기영동한다.
(3) 전기영동이 끝나면 장치의 전원을 끄고 gel을 꺼내서 etbr용액에 넣고 15분간 염색시킨다.
(4) uv lamp로 전기영동이 끝난 gel의 dna 밴드를 관찰한다.
c.band를 보
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다 DNA는 맨 눈으로 관찰이 어려운 시료이기 때문에, 실험 과정에서는 DNA의 시각적 확인을 위해서 특수한 염색 방법을 사용한다. 일반적으로 실험실에서는 Ethidium bromide(EtBr)라는 화학물질을 사용하는데, EtBr은 DNA 염기 사이로 끼어드는 평면구
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