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형질전환을 하지 않은 대조군 배지에는 대장균이 배양되지 않았다.
<그림3.형질전환된 액체 배지 대쟝균 배양 결과>
형질전환된 액체 배지에 대장균을 배양한 결과 대 장균이 배양되지 않았다.
2) Plasmid DNA 분리와 전기영동
<그림4. 전
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분리)
Deoxyribonuclease
Dideoxynucleotide
Disarmed plasmid (무력화된 플라스미드)
DNA sequencing (DNA 염기배열결정법)
Doulble digestion
Electrophoresis (전기영동)
Electroporation (전기천공법)
End-filling
Endonuclease
Episome
Ethanol precipitation (에탄올 침전법)
Ethi
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plasmid isolation
3.전기영동(Electrophoresis)에 의한 DNA분리
4. 제한효소 (restriction enzyme)
5. E.coli : transformaion
6. 접합(Conjugation)
7. Transduction 형질도입-> bacteriophage
8. PCR(Polymerase Chain Reaction)
9. RNA isolation / DEPC solution / 주의점
10. Protein expression / SDS-Pa
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분리
- serial dilution이란?
- 우리 주변의 미생물
3. 형질 전환된 대장균에서 플라스미드 분리
- LB배지(성분, 고체배지와 액체배지)
- Linear DNA와 supercoiled DNA의 특성
- Alkaline lysis method의 원리
4. 주변의 생물에서의 미생물의 분리
- Streaking
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대장균의 배양과 취급 방법
크라운 갈(crown gall) 의 형성
DNA추출과 환인
단백질의 추출과 확인
제한 효소를 이용한 DNA의 절단
전기영동의 원리와 실제
항생제 내성 대장균의 검출
플라스미드의 추출과 확인
대장균의 형질 전환
<중학교 교육
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전기영동 이동거리로 분석한 결과와 일치한다.
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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DNA를 취하는 과정이다. 대장균은 그렇지 않지만 몇몇 세균들은 자연적으로 이런 능력을 가지는 데, 이를 genetic competence(유전적 수용능)이라 한다. 그러나 대장균은 칼슘 이온을 처리하면 DNA를 흡수 할 수 있는 능력을 가질 수 있다. 아직 DNA 흡
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