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PCR(Differential Display Reverse Tran***ase PCR) : 각각의 세포에서 특정하게 발현되는 mRNA를 찾아낼 때.
(k)RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends) : cDNA를 cloning후 ORF screening할 때.
2)Site-directed mutagenesis 를 왜 할까?
단백질의 기능 및 역할을 규명하는데 있어서 분자
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따라 생성되는 단백질의 아미노산 서열이 바뀌기도 한다.
Ex) – 초파리 : 눈의 색깔과 모양, 날개의 모양, 체색 등이 변이 Mutant 란?
Mutant 영향
Mutagen
Mutagenesis 종류
Site-directed mutagenesis
Error prone PCR (Point mutation
DNA shuffling
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PCR 후 바로 secondary PCR을 수행한다면 PCR tube에 존재하는 template sequence가 재생성될 우려가 있다. 따라서 gel에서 원하는 위치의 band만을 골라 elution한 뒤 다시 PCR을 수행하여야 한다.
5) Tm은 primer가 template에 50 % 붙는 온도로서 design한 온도에서 5
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유익한 물질을 생산하는 동물과 고기능 효소를 생산할 수 있는 미생물 등이 그것이다. 이렇게 유전자를 변형시키는 방법을 Mutagenesis라고 한다. 분자생물학의 연구에서 주로 사용하는 Mutagenesis 방법은 바로 Site-directed mutagenesis이다.
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. 1) Stratagene 회사에서 개발하여 판매하는 QuickChange Site-Directed Mutagenesis kit를 이용한 방법
2) uracil를 함유한 single-stranded DNA를 이용하는 방법 (Kunkel mutagenesis)
3) PCR을 이용하여 mutation을 함유한 DNA fragment를 만들어 subclone을 제조하는 방법
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