[생화학 실험보고서] PCR-mediated Mutagenesis

본문내용

ectrophoresis를 하였을 때에도 band의 위치를 확인하였고, elution 후에도 그림과 같이 sequence를 확인할 수 있으므로 sequence에는 문제가 없다고 할 수 있다. 또한, 흐릿하다고는 하나 AD sequence를 확인할 수 있다는 것은 ligation이 진행되는 중이라고 생각할 수 있다. 따라서 만약 cycle이 보다 충분하였다면 AB, CD band는 좀더 흐릿하게(완전히 진행되었다면 band를 형성할 만큼 농도가 없을 것이므로 band가 존재하지 않을 것이다.) , AD band는 좀더 진하게 나타남을 볼 수 있을 것이다.
4) 만약 primary PCR 후 바로 secondary PCR을 수행한다면 PCR tube에 존재하는 template sequence가 재생성될 우려가 있다. 따라서 gel에서 원하는 위치의 band만을 골라 elution한 뒤 다시 PCR을 수행하여야 한다.
5) Tm은 primer가 template에 50 % 붙는 온도로서 design한 온도에서 5 ℃정도 낮춰서 사용한다. 이 때, 온도를 너무 낮추면 template에 non-specific하게 붙기 때문에 좋지 않으며, 온도가 너무 높다면 template와 잘 binding하지 않으므로 온도 설정에 주의가 필요하다.
7. 참고문헌
1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
2) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.
3) http://en.wikipedia.org/wiki/

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생화학,   생화학 실습,   생화학 실험,   생물학 실험,   PCR,   mutagenesis