[생화학 실험보고서] 원심분리기를 이용한 시금치의 cloroplast 분리실험

본문내용

11.36 g, = 2.4 g이 필요하다.(1 ℓ volume으로 계산)
2) RCF와 RPM의 relation equation에 대해 설명하시오.
→ 원심력에 의해 물체가 받는 가속도 g = rω² (ω = 각속도, r = 반지름)
ω = 2πf이므로
∴RCF = g = r * 4π²f²
RPM = 60*f
따라서 RCF = (r = 회전반경(단위 mm))
RPM = Rate Per Minutes, 1분간 회전속도
RCM = Relative centrifugal force, Centrifuge할 때 sample에 걸리는 힘
3) liver tissue에서 differential centrifugation을 사용하는 fractionation experiment를 디자인하고 각 fraction 을 assay하여 identify하라.
→ liver tissue를 homogenizer를 이용하여 잘게 부수고 speed를 달리하여 differential centrifugation을 사용하면 각 세포 소기관이 나뉘어질 것이다. 나뉘어 지는 순서(pellet의 순서)는
nucleus - mitochondria - ER - ribosome, microsome등 - cytoplasm 이 될 것이다. 특별히 liver tissue의 경우 glycogen의 합성과 분해, detoxication등이 많이 일어나기 때문에 sER이 많이 존재할 것이다. 따라서 P3(3번째 pellet)의 양이 다른 세포를 fractionation할 때보다 많이 나타날 것이다.
4) percoll이 무엇이며 왜 40%로 사용하는가?
→ Percoll은 density centrifugation를 통해 cell, organelles, viruses를 분리하는데 사용된다. Percoll은 15~30 nm 직경을 갖는 colloidal silica particles(PolyVinylPyrrolidone (PVP)로 coating되어 있음)로 구성되어 있다. Percoll은 적은 viscosity, osmolaritydensity를 갖으며 독성이 없기 때문에 gradient experiments에 매우 유용하게 사용된다. 40% percoll을 사용하는 이유는 100% percoll의 비중이 1.12 g/ml이므로 40% percoll을 사용하여야 broken chloroplas와 intact Chloroplast를 분리할 수 있는 비중이 되기 때문이다.

키워드

생화학,   생화학 실습,   생화학 실험,   생물학 실험,   원심분리기,   cloroplast 분리,   시금치