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주의)
6)40mM pNPP stock solution 0.5ml를 넣는다.
7)30℃로 지정한 waterbath에서 10분간 incubation 한다.
8)효모 효소가 포함되지 않은 대조군 conical tube(buffer+pNPP만 들어가있음)를 cuvette에 옮겨 410nm spectrophotometer에서 blank로 지정한다.
9)고정화 효소(bead)가
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계산한다.
3) AP의 Enzyme Kinetics
① 1mM PNPP 용액을 연속적으로 희석하여 500, 250, 100, 50, 25, 12.5, 6.25M 용액을 준비한다.
② 준비한 각 농도의 PNPP 1㎖에 AP효소 10㎕를 넣고 voltexing하여 1min 반응 후 1N NaOH를 50㎕ 가하고 voltexing하여 반응을 멈추게 한다.
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PNPP)로부터 인산기를 떼어
내는 가수분해 반응을 촉매한다. 이 실험의 기질인 PNPP는 가수분해되면 노란색 화합물
인 p-니트로페놀을 생성하며, 이 변화를 통해 효소의 활성을 측정할 수 있다.
산성 탈인산가수분해효소는 pH 5.0 이하의 산성
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PNPP)로부터 인산기를 떼어
내는 가수분해 반응을 촉매한다. 이 실험의 기질인 PNPP는 가수분해되면 노란색 화합물
인 p-니트로페놀을 생성하며, 이 변화를 통해 효소의 활성을 측정할 수 있다.
산성 탈인산가수분해효소는 pH 5.0 이하의 산성
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PNPP)를 사용하여 효소반응속도를 구해볼수가 있 다.
<6> 효소의 반응속도에 요인을 주는 요인들
1) 기질의 농도
기질의 농도가 증가할수록 기질 분자와 효소 분자가 서로 충돌할 수 있는 확률이 높아져, 전체 반응 속도가 증가한다.
2) pH
최
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