|
지점에서 45cycle 까지 평평하게 달립니다... Real-time PCR 문제 해결
|
|
|
Taq이 primer-dimer의 발생빈도도 낮습니다.
여러가지를 적었지만 PCR에서 최상의 결과는 90%이상, 아니 99%까지 primer에 의해 결정됩니다.
- Template의 양을 좀더 조절해보시는 것도 한 가지 방법일거 같네요
같은 primer라고 할지라도 100% specific한거
|
|
|
primer)
④ 주형 DNA
⑤ 0.8% 아가로스(TAE 완충액 100㎖ 중에 0.8g의 아가로스를 녹인 것)
⑥ 50 TAE 완충액
⑦ 10 PCR 완충액
6. 참고문헌
Ⅰ. 서적
1. 미생물학실험서. 한국미생물학회. 을유문화사. 1998, pp485∼492.
2. 생화학. D.L. Nelson, M.M. Cox 저. 박길홍 외
|
|
|
n이 안된 것인지..
- Total RNA는 통상 적게는 수십 ng에서 많게는 5ug까지 사용합니다. 보통은 1-2ug 씁니다. 너무 많이 넣으셨네요. 음.. 프로토콜에서 표현을 잘못했거나 그런 것 같습니다.
- total이라고 해도 1ug이면 충분합니다..
전 보통 RNA 뽑고
|
|
|
PCR을 이용하여 유전자를 찾아내는 방법(DDRT-PCR)이 개발되었다.
DDRT-PCR이란 서로 다른 세포로부터 RNA를 분리한 후 특정하게 발현되는 mRNA를 찾아내기 위하여 T 염기 10개와 비특정염기 2개가 연결된 oligonucleotide를 primer로 이용하여 cDNA를 합성한
|
|
 |
PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
1㎕
5\' primer
1㎕
3\' primer
1㎕
DW
17㎕
total
20㎕
< R E F E R E N C E >
1) Gene cloning and DNA analysis An Introduction, T.A.Brown, Fourth Edition
2) Size marker
http://images.google.co.kr/imgres?imgurl=http://www.bioneer
|
|
 |
primer design을 진행하였고, pcr 및 SLIC method를 활용한 뒤에 transformation과 IPTG 처리를 배웠습니다. 그 후 Ni-NTA colum 실험과 SDS-PAGE 후 TagX 단백질의 크기를 비교하여 발현 온도에 따른 binding affinity를 비교하는 연구에 참여하여 실험하였습니다.
더불
|
|
메뉴펼치기
