과학실험(생물, 화학) ) 인간 유전자를 선택하여, 그 유전자와 발현 단백질의 특성을 분석하는 가상의 실험 설계서를 작성

소개글

과학실험(생물, 화학) ) 인간 유전자를 선택하여, 그 유전자와 발현 단백질의 특성을 분석하는 가상의 실험 설계서를 작성에 대한 보고서 자료입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
-Human dipeptidylpeptidase-4(hDPP-4)에 대한 설명
-실험목적
Ⅱ. 가설/가설도출 이유
Ⅲ. Method
-재조합 실험
-PCR 실험
-등전점 전기영동법(Isoelectric focusing, isoelectric electrophoresis)
-BCA 정량
-Western blot analysis
참고문헌

본문내용

펩티드 결합과 접하면 1가 이온으로 환원이 되며 이를 ‘Biuret reaction’이라고 한다. 이는 뷰렛반응으로 보라색을 나타내는 것을 말한다. 실험방법은 다음과 같다.
1. 추출한 단백질을 BCA와 같이 튜브에 넣는다.
2. 흡광도를 측정하여 그 값을 확인을 한다.
3. standard curve와 비교를 하여 농도를 계산을 한다. (단백질 시료환산: 흡광도= 물질 고유의 흡광계수*마이크로플레이트 용액 높이*흡광물질의 농도)
-Western blot analysis
준비사항 : 단백질 시료, Agarose gell, 맴브레인 막, 항체(2가지).
이 방법은 단백질의 유무는 물론 양을 확인을 하는 방법으로 항원-항체 반응을 이용해서 매우 높은 확률로 검출이 가능하다. 이는 특정 단백질에만 결합을 할 수 있기 때문이다. 실험방법은 다음과 같다.
1. 단백질을 추출을 하여 SDS-PAGE를 수행을 한다. SDS-PAGE를 사용하는 이유는 단백질 질량 차이로 분리할 수 있기 때문이다.
2. 단백질을 겔에서 멤브레인 막으로 옮긴다.
3, 위의 블로깅 과정에서 코팅을 해주어 불필요한 것들을 붙지 않게 한다.
4. 1차 항체반응을 진행한다. 이것의 목적은 찾고자 하는 단백질에 특이적으로 붙어 후에 2차항체에서 검출되도록 해주는 작업이다.
5. 결합되지 않은 항체들을 제거하기 위해 씻는다.
6. 2차 항체반응을 진행을 하여 이 때 단백질을 검출시킨다. 2차 항체반응에 쓰이는 항체는 형광물질이 있으며 이를 통해 단백질의 양과 유무를 확인할 수가 있다.
7. 결합되니 않은 항체들을 씻어낸다.
8. 발색반응을 일으켜 단백질을 확인을 한다.
참고문헌
김지윤, 박미령, 변승준, 오건봉, 양현, 정학재, 김경운. 2017. 사람 Dipeptidylpeptidase-4 (hDPP-4) 형질전환 돼지 염색체에 삽입된 외래 유전자 삽입위치 분석. 한국동물번식학회. Volume 41 No 2 Supplement.
이대호. 2014. Dipeptidyl Peptidase-4 (DPP-4) 억제제. 대한내과학회지: 제 87 권 제 1 호.
한상기(S . K . Han), 정의용(E . Y . Chung), 신유철(Y . C . Shin), 양교석(K . S . Yang). 1992. 논문 ; 육종 번식 : 등전점전기영동법에 (等電點電氣泳動法) 의한 제주재래마 Hb 단백질의 유전적 다형현상에 관한 연구. 한국축산학회. 34권 6호.

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과학실험,   유전자,   단백질 ,   실험