플라스미드 분리

소개글

플라스미드 분리에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Introduction
(1)플라스미드
(2)기본적 특징
(3)플라스미드의 분류
(4)세균 이외의 생물에 있는 플라스미드

2. Materials

3. Methods
(1)플라스미드 DNA 정제 순서
(2) Identification of plasmid DNA by agarose gel electrophoresis

4. Result

5.Discussion
(1)실험 과정에 대한 고찰
(2)Vector의 경우 3개의 band로 나왔는데, 아래로부터 CCC(covalently closed circular), Nicked, Linear form으로 왜 이동성의 차이가 발생하는지 각각의 구조와 연관지어 설명하세요.(band가 여러개 나타나는 이유)
(3) 잘 뽑았을 경우, CCC form이 많이 뽑히고, 다른 form들은 적게 나온다. 우리 실험 결과를 보면 그렇지 않은데 어떤 원인들이 있을지 생각해 보세요.
(4) cloning이 무엇인지 그 과정은 어떻게 되는지 조사해 보자.

7.Reference

본문내용

러리로부터 원하는 유전자를 찾기 위하여 우선적으로 분리, 준비한 돌연변이주(예, arg-
)를 숙주세포로 이용해서 야생형의 라이브러리 유전자들로 형질전환시킨다. 원하는 단백질(효소)을 암호화하는 arg+
DNA 절편을 포함하는 형질전환 세포는 그 효소가 합성되기 때문에 최소배지상에서 자랄 수 있어서 쉽게 스크리닝(screening) 할 수 있다. 따라서 이 형질전환주로부터 원하는 효소를 분리하여 효소의 특성을 확인하면 최종적으로 올바른 클론인지 확정지을 수 있다.
③서던 블로팅
경우에 따라서는 원하는 단백질을 분리한 후 그 유전자를 클로닝할 수 있다. 단백질의 아미노산 배열로부터 염기배열을 추정하여 그에 따른 DNA를 합성한다. 이렇게 합성된 DNA를 유추 탐침자(degenerate probe)라고 하며, 이를 유전자 은행(gene bank, gene library)과 교잡(hybridization)시키면 원하는 유전자를 완전히 선별할 수 있는데, 이것을 서던 블로팅(Southern blotting)이라 한다.
실질적으로 재조합 플라스미드를 운반하는 세포를 평판배지에 도말하여 성장시킨 다음 이 콜로니들을 니트로셀룰로오스막 필터(nitrocellulose membrane filter)에 옮긴다. 복제된 막을 알칼리(NaOH)용액으로 처리하여 세포를 용해시키고 DNA를 변성시킨다. DNA는 80 에서 막을 구우면서 고정시킨 후 방사성 동위원소로 표지된 탐침자 DNA와 교잡시켜 원하는 유전자를 운반하는 클론을 찾는다(콜로니 교잡). 이 방법은 짧은 시간에 많은 콜로니를 시험하여 올바른 클론을 선별할 수 있다.
④ 면역학적 방법
만약, 상보성 실험분석이 가능하지 못한 경우, 예를 들어 세균에 상보성이 없는 호르몬을 가진 진핵세포의 유전자를 클로닝하려고 할 때는 상보성 검사는 사용할 수 없다. 이러한 경우 좋은 방법으로서 특별한 항체와 반응시킴으로써 희망하는 단백질을 생산하는 클론을 찾을 수 있다.
7.Reference
Life the science of biology / purves, sadava, orians Heller
Biosci.snu.ac.kr-교양관련 게시판-핸드아웃
생명과학의 이해 , 을유문화사
http://kimwootae.com.ne.kr
http;//genomes.com.ne.kr/mole/m24.htm
http://www.g2bank.com/life/cont_life_07.html

키워드

플라스미드,   유전자,   재조합,   생물 실험,   DNA