배양배지의 준비와 멸균

소개글

배양배지의 준비와 멸균에 대한 보고서 자료입니다.

목차

Ⅰ. 실험 목적

Ⅱ. 실험 원리

Ⅲ. 실험 방법

Ⅳ. 실험시 주의사항

Ⅵ. 참고문헌

본문내용

배지가 찢어지는 등, 도말을 제대로 할 수가 없다.
5. clean bench와 hepa filter
가. clean bench
배지를 보관할 때 오염되지 않도록 하는 장치. 특히 PRE FILTER, HEPA FILTER, ULPA FILTER가 있어 오염을 막아준다. (<오른쪽>)
나. hepa filter
<그림>에서 보면 아래쪽의 안쪽에 체모양의 칸막이가 있음을
볼 수 있다. 이것이 'hepa filter'인데, 이것은 1차적으로 clean bench 안에 공기가 유입될
때 먼지나 기타 다른 오염물질을 걸러주는 역할을 한다. 만약 자신이 유리칸 안에서 작업
을 해야할 경우, 오염물질이 들어갈 수도 있는데 이를 방지하기 위해 공기는 밖에서 hepa
filter로 들어가는 방향으로 들어갔다가 작업하는 자신의 방향으로 나오게 된다. 그러면 유
리칸 안에 있던 깨끗한 공기가 나오는 것이므로 작업을 하면서도 오염을 방지할 수 있다.
Ⅲ. 실험 방법
1. 시약 및 기자재
균주: Escherichia coli
시약: Tryptone, Yeast extract, NaCl, Acid or Alkali, 증류수
기자재: Autoclave, Petridish, Test tube, Flask(100㎖)/ Silistopper, 멸균테이프
2. 배지 만들기 agar를 이용하여 고체배지를 만든다.
3. 멸균
①배지가 담긴 플라스크의 마개는 종이나 알루미늄박으로 싸서 너무 젖지 않도록 하고,
시험관의 나선형 뚜껑은 약간 느슨하게 닫는다.
②멸균 테이프를 붙인다.
③고압증기멸균기 내에 증류수가 충분한가를 확인한 후, 멸균 대상물을 넣고 뚜껑을 닫아
멸균한다. 121 , 1.5기압에서 15분동안 멸균한다.
④멸균기내 압력과 온도가 떨어졌는가를 확인한다.
⑤멸균기내 수증기는 배기구를 통해 배출하고 배기구를 닫는다.
⑥멸균기내 뚜껑을 열고 내용물을 꺼낸다. 특히, 시험관은 어느 정도 식은 후 나선형 뚜껑
을 닫는다.
·Autoclave의 압력이 약 51b정도 상승하면 밸브를 열어 처음 2∼3분간은 나오는
증기를 내뿜고 다시 밸브를 잠가 151b의 압력이 상승할 때까지 둔 후 15분이 지나면
서서히 압력을 빼고 전원을 끈 후 autoclave의 뚜껑을 열어야 한다.
·멸균이 제대로 되었는지를 확인하기 위해 Bacillus stearothermophilus를 배양물과
함께 멸균한 후, 1∼7시간 동안 다시 배양하여 균주가 혼탁되었는지 여부를 확인한
다. 또는 멸균 tape나 strip paper 가 검정색으로 변했는지 확인한다.
·피멸균품들은 수증기와 접촉하여 젖어 있으므로 탱크 내에서 꺼내기 전에 건조시켜야만 한다.
·진공건조를 이용할 때에는 탱크내가 진공상태이므로 멸균장치에서 멸균한 물건을 꺼내
기 전에 탱크내를 대기압으로 되돌리는 것이 필요하다.
·10일 후, 샬레에 colony가 보이는지 살핀다. 만약 colony가 보인다면 그 배지는 오염된
배지이다.
참고

·Autoclave에 부착된 계량기 및 기록계에 의한 물리적인 조건의 확인 방법
·화학적 지시계를 이용하는 화학적인 방법 및
·생물학적 지시계를 이용하는 생물학적인 방법.
이들 중 어느 한가지만 가지고 완전하게 멸균 여부를 확인하기는 어렵다. 따라서 적어
도 두 가지 이상의 방법을 병용하는 것이 이상적인 방법이다.
Ⅳ. 실험시 주의사항
일반적으로 미생물 시험에 있어서 유의할 점은 검체 중에 함유된 미생물의 상황이 시시각각으로 변할 수가 있으며, 처음 검체 중에 함유되어 있던 미생물 외의 다른 미생물오염이 조작 중에 일어날 수 있다는 점이다. 이러한 실험상의 오염을 방지하기 위하여 모든 조작을
원칙적으로 무균 조작을 하여야 하며, 동시에 실험실 내의 청결을 유지하여야 한다. 멸균이 끝난 후 반드시 멸균기내 압력과 온도가 떨어졌는가를 확인하고, 멸균기 내의 수증기를 배구기로 완전히 배출한 후 뚜껑을 연다. 멸균 시간은 내용물에 따라 적절히 변화시켜야 한다.(단, 배지 내용이 손상되지 않는 범위 내에서 멸균한다) 포화 수증기가 되지 않으면 멸균 효과가 떨어진다. 따라서 종류에 따라서는 증기가 내부로 침투할 수 있도록 멸균할 필요가 있다. 시험관 나선형 뚜껑은 약간 열어 멸균함으로써 가열시 공기 팽창에 의한 파손을 막는다. 열에 약한 성분은 여과하고, 열에 안정한 성분은 별도로 습윤 멸균한 후 무균적으로
둘을 섞어 사용한다.
<그림> 오른쪽에 보이는 알갱이들이 colony들이다.
Ⅵ. 참고문헌
<도서검색>
·균학개론 (J.W.Deacon원저: 류천인, 조덕현 편역: 대광문화사: 1994. 3. 발행: p.119~127)
·미생물학 (김관수 외 8인 공저: 대광문화사: 1994년 3월 발행: p.243~244)
·소독멸균학 (김용호·함건주 공저: 도서출판 고려의학: 1995년 1월 발행: p.29, p137~223)
·Essentials of Molecular Biology (George M.Malacinski: Jones and Bartlett: 5판: p.3)
· 미생물학 ( Roger Y. Stanier 아카데미 서적, p.17-36 )
· 미생물학 실험서 ( 김종협 외 2명, 대광문화사, 92. 2. 15, p.11-16 )
· 최신 미생물학 ( 박석기 외 5명, 신광문화사, 95. 2. 20, p.84-164 )
· 미생물의 생물학 ( Brock, Madigan, Prentice-Hall, 92. 8. 15, 125-133 )
<인터넷 검색>
·http://orchidlab.pe.kr/tissue/tissue03.htm
·http://www.chungnam.rda.go.kr/html/cul3.htm,
·http://www.chungnam.rda.go.kr/html/cul2.htm#auotclave
·http://nengjung.kit.ac.kr/~ckisu/fsl/fsl02/fs02.htm
·http://user.chollian.net/~jgawoori/culture/h3.html
·http://www.sugong.co.kr/eng/product_18.asp

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미생물,   배양배지,   영양배지,   colony,   자연배지,   합성배지,   선택배지,   멸균