DNA의 제한효소 절단과 전기영동(Electrophoresis)

소개글

DNA의 제한효소 절단과 전기영동(Electrophoresis)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 서론
2. 실험이론
3. 재료 및 기구
4. 실험방법
5. 주의사항
6. 참고사항
★결과★

본문내용

tion이나 stained gel을 다룰 때는 항상 disposable glove를 착용한다.
2) 제한된 싱크대 주변지역에서만 EtBr용액을 사용한다.
3) 못쓰는 staining gel이나 EtBr solution은 처리방법에 따라 처리하여 버리거나 한 곳에 모아둔다.
- 1 volume의 0.05 M KMnO4를 넣고 섞는다.
- 1 volume의 0.25 M HCl를 넣어 섞고 실온에서 6시간 정도 둔다.
- 1 volume의 0.25 M NaOH를 넣고 섞는다.
★ Supercoiled DNA와 linear DNA
대부분의 plasmid는 세포내에서 supercoiled circular DNA로 존재하며 이러한 supercoiling은 plasmid replication 과정 중에 topoisomerase에 의해 수행되어진다. plasmid DNA 가닥에 손상된 곳이 없을 때 covalently closed-circular(CCC) DNA를 형성하며 반대로 두 가닥 중 어느 한 가닥의 DNA상에 손상이 있을 경우 supercoiling이 풀리게 되는데 이러한 것을 relaxed 또는 open-circular(OC) DNA라 한다. 고등생물의 DNA는 linear form을 가지며 부분적으로 supercoil을 형성하고 있고 하등동물의 (특히 미생물) DNA는 circular form으로 supercoiling되어 있다. 이러한 supercoil은 극히 작은 cell내에 엄청나게 긴 DNA를 넣기 위한 하나의 수단이다. DNA의 coiling 상태에 따라 DNA를 변성시키는 자극에 대한 민감도에 차이가 난다. 즉, plasmid와 같이 supercoiling 정도가 심한 경우에는 linear DNA 보다 열, 알카리 등에 의한 DNA 변성이 덜 일어날 것이다. 본 실험 과제는 대장균으로부터 plasmid DNA를 분리하는 실험이다. 우리는 약 4,000,000 염기 쌍을 가진 숙주 DNA (host chromosomal DNA)와 약 4000 염기쌍의 plasmid DNA를 지닌 대장균을 사용할 것이다. 물론 이들은 둘다 원형이지만 DNA를 분리하기 위하여 세포를 파괴할 때 숙주 DNA는 물리적 충격(보통 shearing force)에 의해 잘려져 대부분이 20,000 내지는 50,000 bp의 linear 형태의 DNA가 된다 (4,000,000 bp 의 DNA를 아무런 손상 없이 분리하는 것은 불가능함). 하지만, plasmid는 크기가 작기 때문에 보통의 실험 조건에서 intact하게 유지할 수 있다. 그리고 plasmid는 세포당 한 copy로 존재하는 숙주 DNA와는 다른 독립된 복제조절 기작을 가지고 있기 때문에 한 세포내에서 수백 내지는 수천 copy로 존재할 수 있으며 이들 모두 highly supercoiled된 상태이다. 이러한 plasmid 물리적 성질들은 실험실내에서 손쉽게 숙주 DNA의 오염 없이 plasmid DNA를 분리할 수 있는 근거를 제공한다.
★결과★
EcoR I 처리
Hind III 처리

키워드

DNA의 제한효소 절단과 전기영동,   DNA의제한효소절단,   전기영동,   Electrophoresis,   DNA