competent E-coli & Transformation
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소개글

competent E-coli & Transformation에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1.실험 제목

2.실험 목적

3.실험 기구및 시약

4.실험 이론
1)유전자 조작 원리
2)vector
3)vector의 종류
4)plasmid
5)λphage
(1) competent cell이란?
(2) competent cell을 만드는 방법
7) Transformation
8) 형질 전환된 세포의 선택
9) Transfection 과 Transformation

5. 실험방법

본문내용

. 그런 후에 transformed bacteria가 plating 되어 항생제에 노출되었을 때 그들은 이미 생존할 수 있을 만큼 충분한 효소를 합성하고 있을 것이다.
9) Transfection 과 Transformation
- transfection 과 transformation 은 둘 다 세포에 외래 유전자를 벡터를 이용해 주입하는 것으로 기본적으론 같은 개념이다. 단지, 다른 점이 있다면 transfection은 virus, 즉, phage DNA를 이용하여, 형질전환을 시키는 것이고 transformation은 plasmid으 lwlrwjq적인 유입을 통해 형질전환을 시키는 것이다.
transfection은 일반적으로 배양된 진핵생물 세포에 유전자 DNA를 주입하여 세포의 형질을 변화시키는 방법을 말한다 (bacteria transformation과 비슷). 보통 전체 세포중 수 ~ 수십%에서 transfect된 유전자가 발현된다. Phage의 경우 bacteria의 DNA에 끼어 들어가있다가, 복제가 되어 나올 때 자신의 원래 DNA가 아닌 bacteria의 DNA를 가지고 나오는 경우가 있다. 이를 이용한 것이 transfection이다. 지금은 주로 phage DNA에서 불필요한 부분(cell을 lysis 시킨다던가, 또는 병을 일으키는)부분을 제거하고, 그 부분만큼 인위적인 DNA를 넣어주어, bacteria에 infection을 시킨다. 그러면 그 DNA가 bacteria의 DNA에 끼어 들어가게 될 것이고, 결과적으로 우리가 넣어준 DNA의 형질을 갖게 된다. Transformation의 경우, 인위적인 DNA를 가지고 있는 plasmid등을 물리적인 방법(heat shock or electronic shock)등을 통해, 직접적으로 bacteria에 넣어줌으로써, 형질을 변환시킨다.
5. 실험방법
1) LB 5에 BL 21 5를 넣고 37℃에서 밤새 배양(incubate)한다.
2) LB 5에 (1)을 50 넣고 37℃에서 3시간 동안 배양(incubate)한다.
3) 1.5 eppendorf tube에 (2)를 넣고 10000rpm으로 1분간 원심분리(centrifuge)한다. 상층액(supernatant)을 뽑아내고 1의 를 넣고 pipette으로 cell을 깬다. (Vortexing하면 cell이 stress받기 때문에 pipetting을 한다)
4) incubation on ice for 30mins.
5) centrifuge for 5mins 10000rpm. 상층액을 버린다.
6) 를 200넣고 pipetting으로 cell을 깬다.
7) Ligation (KG-MKP3) sample을 2넣는다.
8) incubation on ice for 30mins.
→ stress를 주지 않기 위해서 얼음을 건드리지 않는다. (transformation이 안된다.)
9) incubation for 90sec at 42℃
→ 이 과정에서 membrane에 ligation sample이 달라붙어 들어간다.
10) incubation on ice for 2mins. → cell이 닫힘.
11) LB 800를 넣고 incubation for 40mins at 37℃
12) centrifuge for 4mins 5000rpm.
13) 상층액 중에서 600만 버린다. →농축과정
14) pipetting으로 pellet을 깬다.
15) plate(LB-Agar Amp)에 (14)를 100담고 incubation overnight at 37℃
-출처-
http://kbiotec.kijeon.ac.kr/pro_master/book_2_2.asp

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  • 페이지수8페이지
  • 등록일2005.03.27
  • 저작시기2005.03
  • 파일형식한글(hwp)
  • 자료번호#290269
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