현대산업에이용되는분리및정제

소개글

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목차

◎분리의종류
1.밀도차에 의한 혼합물의 분리
2.끓는점차에 의한 혼합물의 분리
3.용해도 차에 의한 혼합물의 분리

◎설탕의 정제
1.설탕의 종류
2.설탕의 제조과정
3.백설탕과 흑설탕의 성분 비교...

◎천연옻칠(漆)의 정제(精製)

◎원유의 정제와 석유제품

◎소형 칩으로 DNA를 분리 및 정제하는 기술

◎Plasmid DNA의 분리 및 정제방법
1.분리방법
2.정제방법
3.정리


◎참고문헌

본문내용

ltracentrifugation step과 ethidium bromide를 사용하지도 않는다.
Materials & Method
A. Materials
Glucose/Tris/EDTA solution
10mg/ml DNase-free RNase
NaOH/SDS soln.
Potassium acetate soln.
Buffered phenol
24:1 chloroform/isoamyl alcohol
10M ammonium acetate
100% and 70% ethanol
TE buffer
PEG soln.
3 M sodium acetate, pH 5.5
Sorvall SS-34 or Beckman JA-17 rotor
Sorvall HB-4 rotor
B. Method
1. crude lysate prep.의 마지막 스텝에서 얻어진 pellet을 1ml glucose/Tris/EDTA soln.에 녹인다.
2. 최종농도가 20㎍/ml가 되도록 RNase을 첨가하여 20min, 37℃에서 정치한다.
3. NaOH/SDS soln.을 2ml 첨가한다. tube를 상하로 뒤집어 섞고 실온에서 5∼10min 정도 정 치한다.
4. 1.5-ml potassium acetate soln.을 첨가하여 tube를 상하로 뒤집어 섞고 실온에서 5∼ 10min 정도 정치한다.
5. 실온에서 10분 동안 원심분리한다(20,000×g).
6. 상등액을 새로운 tube에 옮긴다.
흰색의 침전물은 SDS-potassium complex이다. 이것은 다른 chromosomal DNA를 포함하며 crude lysate가 남아 있다.
7. phenol과 chloroform/isoamyl alcohol로 extract한다.
8. 10M ammonium acetate의 1/4vol을 용액에 넣고 섞는다. 100% ethanol의 2vol을 tube에 넣고 드라이아스에 10min 동안 정치한다. 원심분리(10min, 4℃, 10,000×g)하여 plasmid DNA를 회수한다.
9. 70% ethanol로 pellet을 씻고 vacuum에서 건조시킨다. 2ml TE buffer을 첨가하여 녹이고 0.8ml PEG soln.을 첨가하여 0℃에서 1∼15hr 동안 정치한다.
10. 원심분리(20min, 4℃, 10,000×g)하여 plasmid DNA을 회수한다.
11. 1ml TE buffer에 plasmid DNA를 녹이고 ethanol prep.을 행한다.
12. TE buffer로 침전된 plasmid DNA를 녹인다.
3.정리
plasmid DNA의 charge를 이용-plasmid와 같은 DNA는 일반적으로 (-)charge를 띠므로 anion-exchange resin을 이용한 column을 사용하여 분리한다.
·size를 이용한 분리 - centrifugation을 이용함 (1번) conformation을 이용한 분리 - plasmid는 3가지 형태로 존재 (하나의 plasmid가 electrophoresis상에 3개의 band로 보 인다.)
linear > open circular > supercoiled
① alkaline denaturation을 이용 - pH변화에 따라서 non-supercoiled DNA가 denaturation되는 성질을 이용 그러나 supercoiled DNA는 안정함
ⓐ sodium hydroxide 첨가 (pH 12∼12.5) - non-supercoiled DNA의 H-bonding을 파괴하여 single stranded DNA형성
ⓑ sodium acetate 첨가 (pH 4.8) - 파괴된 ssDNA가 tangled mass형성
ⓒ centrifugation - tangled mass와 supercoiled DNA의 분리
② Ethidium bromide-caesium chloride density gradient centrifugation - plasmid DNA의 밀도(1.7 g/cm3)를 이용하여 분리
ⓐ protein이 가장 위층에, DNA가 중간 그리고 RNA가 가장 아래쪽에 위치
ⓑ EtBr의 도입 - double helix의 부분적인 unwinding을 유발 (>3.4Å), linea
r DNA의 사이에 끼어들어 0.125 g/cm3만큼 밀도를 감소시킴
(linear and open circular DNA와 supercoiled DNA의 분리를 초래함), DNA에 결합된 EtBr은 n-butanol로 제거
◎참고문헌
http://blog.naver.com/agelf.do?Redirect=Log&logNo=140019203799
http://www.kordic.re.kr/%7Etrend/Content543/biology14.html
http://kin.naver.com/open100/entry.php?eid=PmdS2UfMjVhsrKj6yfDVdX33+Jmu0K1o
http://kin.naver.com/open100/entry.php?eid=90F+QYsrCFXLkRfUUqI2OHFP1o8hhw3h
http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=6&dir_id=601&eid=F43v/4f29YaNsutHa5Mc3iD6++YCG+zp&ts=1067175334
http://blog.naver.com/zestmom.do?Redirect=Log&logNo=60018675524
http://km.naver.com/list/view_detail.php?dir_id=80106&docid=1309133
http://100.naver.com/100.php?id=79381
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http://sep.kaist.ac.kr/
http://ipcp.edunet4u.net/~stu1/sci/s41_55_1.htm
http://km.naver.com/list/view_detail.php?dir_id=110601&docid=1492251
http://km.naver.com/list/view_detail.php?dir_id=90701&docid=1474059

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