DNA sample PCR

목차

1. Title

2. materials

3. Purpose:

4. Method

5. Result

6. Discussion

7. 보충자료

8. Reference

본문내용

1. Title: DNA sample PCR
2. materials: 2㎕ PCR buffer, 0.4㎕ dNTP(0.1㎕ each of dATP dCTP dTTP dGTP), 0.2㎕ primer (10㎕ each of primer, 0.1㎕ Taq polymerase, 16.3㎕ DW, 1㎕ template DNA, micro pipette, tip, micro tube
3. Purpose:
1) ds-DNA separation: high temperature (90도 이상) ss-DNA 로 분리된다.
2) primer attachment: 온도를 낮추어 분리된 ss-DNA와 인위적으로 합성한 primer가 서로 상보적인 부위에 결합하도록 함. (primer - DNA polymerase의 중합반응 개시를 위해 필요한 짧은 RNA가닥, 혹은 ss-DNA fragment)
3) synthesis: renaturation을 방지하기 위해 60-70도 정도의 온도에서 taq DNA polymerase를 써서 DNA 중합반응을 한다.
4) 합성된 DNA를 다시 고온처리 해서 1번부터 반복한다. 1~3번이 1 cycle이 된다.
4. Method
1) 모든 시약을 micro pipette을 이용 하여 master mix를 만든다.
2) micro pipette을 이용 하여 만들어진 master mix를 필요 한 만큼 따내어 micro tube에 넣는다.
3) micro tube에 넣은 master mix를 PCR 기기에 넣고 실행 한다.
6. Discussion
PCR과 전기영동에 대한 설명을 이론적으로만 공부해왔던 것을 드디어 실험을 통해서 직접 해보게 되었다. 실험이 생각보다 직접 수행하는 것에 비해 기다리는 시간이 많아서 조금 지루하기도 하였다. 하지만 조교님과 이런 저런 이야기를 하면서 기다리다 보니 생각보다 시간이 금방 갔다. 실험을 하면서 거미 동정과 같이 눈으로 직접 확인하고 그 자리에서 바로 결과를 낼 수 없다는 것과 달리 오랜 시간 기다려서 결과가 나오는 것이기 때문에 그 결과에 많은 기대를 하게 되었다. 첫 실험이니만큼 멋지게 성공했으면 하는 바람이었다. 그리고 아주 작은 단위를 가지고 실험하는 것이었기 때문인지 실험 도구도 아기자기 한 느낌이 들었다. 결과는 대성공이었다. 모든 실험조원들의 결과가 모두 잘 나타나서 기분이 좋았다. 다른 조는 조원 모두 안나 온 경우도 있었는데 그 이유를 생각해 보았다. 그것은 개인 한 사람의 문제가 아니라 전체적으로 잘못 된 것이라고 생각한다.
Template DNA의 양이 적었을 때, PCR cycle의 횟수가 부족 하였을 때,

키워드

미생물학실험,   실험보고서,   PCR ,   Template,   DNA sample