Isolation of Pigment from Spinach(시금치의 색소 분리)

목차

1. Title
2. Theory
①크로마토 그래피란?
②크로마토그래피의 분류
③종이 크로마토그래피의 원리
④종이 크로마토그래피의 방법
3. References
4. procedure

본문내용

긴 거름종이를 사용하여 한 방향으로 1회만 전개하는 1차원법(one-dimensional method)과, 정사각형의 거름종이를 사용하여 직각 방향으로 두 종류의 용매로 전개시키는 2차원법이 있다.
<전개방법>
(6) 반점의 검출 방법
전개가 끝난 종이는 전개 용기에서 꺼내어 용매의 전진선을 연필로 표시해 두고, 상온 또는 오븐 속에서 건조시킨다.
착색된 시료인 때에는 육안으로 곧 반점을 확인할 수 있으며, 또 형광성 시료는 암실에서 자외선 램프로 비춰 보면 반점을 식별할 수 있다. 무색의 시료는 특수한 발색시약을 분무기로 골고루 뿌려서 반점이 나타나게 한다. 반점의 위치가 확인되면 그 중심점과 출발선 사이의 거리를 측정하여 Rf값을 계산한다.
Rf값은 거름종이에 시료를 점적한 출발선과 용매가 스며든 앞 끝까지의 거리, 즉 용매 전진선(solvent front) 및 각 물질이 나타난 점까지의 거리를 재어서 값을 계산한다.
즉, 그림에서 성분 A와 성분 B의 Rf값은 각각 0.30 및 0. 60이다. Rf값은 전개 온도, 용매의 pH값, 불순물 및 다른 여러 가지 조건에 따라 변하므로, 문헌에 있는 Rf값만으로는 미지 시료를 확인할 수 없다. 미지 시료를 확인하기 위해서는 반드시 이미 확인된 같은 표준 화합물을 동시에 전개시켜 확인해야 한다.
3. References
http://biosci.snu.ac.kr/includes/download.php?file=%BD%C4%B9%B0+%BB%F6%BC%D2+%BA%D0%B8%AE.ppt&path=Ym9hcmQ=
http://user.chollian.net/~hl5nol/chromato-m.htm
4. procedure
① falcon에 용매를 5ml 넣고 내부에 용매기체가 포화되도록 기다린다.
② 여과지를 tube에 적당한 크기(2.5 X 12cm)로 자르고, 한 쪽 끝을 잘라 뾰족한 모양을 이루게 한다. 끝에서 2.5cm 띄고 연필로 선을 긋는다.
③ 엽록소 추출물은 시금치 3g에 100% aceton 3-5㎖ 정도를 넣고 빠른 속도로 갈아서 만들고 이를 원심분리하여 상등액을 이용한다.
④ Pasteur pipette을 이용하여 엽록소 추출물을 연필로 그은 선 중앙에 원 모양으로 점적한다(말려가면서 3-4회 반복 점적).
⑤ 여과지를 이쑤시개에 고정시킨 후, 전개 용매가 들어 있는 tube에 넣어 약 0.5cm정도만 용매에 잠기도록 한다. 이 때 3M paper가 시험관 벽에 닿지 않도록 주의한다.
⑥ 이 방법을 이용하여 몇 가지 색소가 분리됨을 확인하고, 각 색소의 Rf 값을 구한다.
⑦ 위의 여과지에 나타난 여러 밴드 중 가장 두드러지게 나타나는 녹색밴드 부위를 다른색 밴드가 섞이지 않도록 잘라낸다.
⑧ 잘라낸 것을 e-tube에 담고 1ml의 아세톤을 부은 후 잘 흔든다.
⑨ 종이는 꺼내고, Spectrophotometer를 이용하여 380nm에서 700nm까지의 파장에서 20nm 간격으로 흡광도를 측정하여 그래프를 그려 최대 흡수파장을 알아본다.
5. Result

키워드

의약학,   약학,   유기화학,   유기의약품,   유기의약품실습,   유기화학실험