[미생물학 실험]미생물의 현미경 관찰 - 단순, 그람, 매질 염색법에 의한 현미경 관찰 -

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[미생물학 실험]미생물의 현미경 관찰 - 단순, 그람, 매질 염색법에 의한 현미경 관찰 -에 대한 보고서 자료입니다.

목차

실험 2. 미생물의 관찰

2-1 현미경 관찰 및 염색 (광학현미경)

2-2 염색법

2-3 단순염색

2-4 그람염색법

2-5 매질염색

2-6 실험결과

2-7 고찰

2-8 참고문헌 / SITE

본문내용

수 있으며 검사자의 숙련도와 교육 과정 및 내용이 보다 충실할 때 정확한 결과를 보고할 수 있다.
③ 그람염색에서 균종이 발견되지 않는 화농성 검체에서는 추가 염색이 필요하다.
④ 시약과 염색 기구의 오염, 항균제 사용, 일반적인 배양 조건에서는 증식이 안되는 균종이 있을 때는 그람염색은 양성 결과이나 배양은 음성일 수 있다.
⑤ 부적절하게 채취된 검체의 그람염색은 임상적 소견과 맞지 않는 그릇된 결과를 줄 수 있다.
2-5 매질염색
1.실험의 목적
염기성 염료에 잘 염색되지 않는 세균의 형태 관찰함에 있어서 세균를 염색하지 아니하고 배경을 염색하여 관찰하고자하는 세균의 형태를 관찰함에 있다.
2.실험의 원리
매질염색에 쓰이는 염료는 발색단이 음이온이기 때문에 일반적으로 음전하를 띠는 세균을 염색시키지 못하고 염료가 세포 주변에 집적된다. 이 염색법은 다른 염색법과는 달리 세균을 화학약품이나 열처리하지 않으므로 세균의 모양을 변화시키지 않고 관찰할 수 있다는 장점을 가지고 있다. 또한 Spirochaetes등과 같이 염기성 염료로 잘 염색되지 않는 세균이나 황 Poly-β-hydroxybutyrate입자 및 포자 등과 같은 굴절성 함유물(refractile inclusion)의 존재 유무의 판별에 쓰이기도 한다.
매질 염색에 사용되는 염료는 니그로신(nigrosin)을 주로 사용하나 india ink, congo red 등도 사용된다. 니그로신을 처리한 경우 암청색 바탕에 염색되지 않은 세균이 밝게 나타난다.
3. 실험 재료 및 방법
1) 재료 및 기구
광학 현미경, 무균대, 분벤버너, 백금이, 슬라이드, 덮개유리, 렌즈종이,Nigrosin, 관찰용 기름
2) 방법
① 슬라이드의 오른쪽 끝에 Nigrosin 용액을 한 방울 떨어뜨린다.
② 여기에 백금이로 사면배지의 균을 묻혀서 잘 섞되 Nigrosin 용액이 퍼지지 않도록 주의 한다.
③ 다른 슬라이드의 한쪽 끝을 염색액위에 경사지게 접촉한 후, 염색액이 얇게 퍼지도록 접촉면을 따라 왼쪽으로 가볍게 밀어준다.
④ 이렇게 도말된 슬라이드를 실온에서 건조시킨 후 유침유를 떨어트리고 관찰한다.
2-6 실험결과
구 분
그람염색
미생물형태
원형의 모양으로 생김
염색약
1. Crystal violet 1분
2. Gram's Iodin 1분
3. 95% Ethanol
4. Safranin 30초
관찰 배율
(접안렌즈15*대물렌즈100)=1500배
색깔
분홍색
관찰 결과
Gram 음성
1. 그람염색 결과
그람염색
그람염색후 관찰하였을때 분홍색으로 염색된 미생물만 보였으며 보라색으로 염색된 미생물은 안보인걸로 보아 수돗물에서 채취한 미생물은 그람 음성균으로 확인 되었다.
2. 매질염색 결과
구 분
그람염색
미생물형태
원형의 모양으로 생김
염색약
Nigrosin
관찰 배율
(접안렌즈15*대물렌즈100)=1500배
색깔
배경은 회색에 미생물은 투명함
매질염색
매질염색 후 현미경을 보기 전 예상했던 형태는 검은배경에 투명한 미생물이 보이는 모습이었다. 그러나 확인했을때는 조금 다른 모습이었다. 미생물 배경은 회색이었고 미생물은 투명하였다. 예상과는 조금 틀렸지만 미생물이 동그란 형태로 확실히 보였다.
2-7 고찰
이번 현미경의 관찰 실험은 대단히 조심성과 정밀함을 요하였다. 현미경은 정교한 광학 기구이기 때문에 충격을 주지 않아야 하기 때문이다. 또한 현미경에 대하여 충분한 지식을 습득한후 현미경 실험을 할수 있었다. 현미경 실험을 할때 초첨을 맞추기 위해서 조동나사를 사용하여 대물렌즈를 위에서부터 아래로 내리면서 초첨을 맞추다가 물체가 있는 슬라이드와 대물렌즈가 부딪쳐 슬라이드가 깨어지고 대물렌즈가 파손될 우려가 있었다. 그리고 실험이 끝난 후 에는 반드시 현미경을 거꾸로 들면 안되고, 밑바닥을 받쳐서 운반하여야 한다.
단순염색(simple staining)은 세포를 염색하기 위해 염료를 사용, contrast를 증가 시켜 현미경으로 더 쉽게 볼 수 있게 한다. 염료는 유기 화합물로 이들은 특이한 세포물질과 친화력을 갖고 있다는 것을 알았다. 세포주변은 음이온으로 하전(荷電) 되어 있어 양이온 염료인 Crystal violet과 세포주변구조와 결합하여 자주색으로 발색하였다.
그람염색은 세균을 crystal violet의 염료로 염색시킨 후에 알콜로서 탈색시키는 동안에 crystal violet의 자주색이 탈색되면 그람음성으로, 탈색되지 않고 자주색이 남아 있어서 관찰이 잘 되면 그람양성으로 정의하고 있다. 그람음성은 알콜로서 색처리가 끝나고 붉은색의 safranin으로 이중염색을 시켜보면 분홍색으로 염색 된다. 매염제로 Iodine을 사용하는데 이는 그람양성세균이 알콜로서 탈색되는 것을 막는 역할을 한다.
Negative staining는 음이온의 염료를 사용하여 세균을 염색시키지 못하고 세균 주변부에 염색된다. 니그로신(Nigrosin)을 사용하여 염색시킨 결과 바탕색은 회색에 염색되지 않은 세균들을 관찰할 수 있었다.
이번 실험을 통해서 3가지의 염색법과 각 염색법에서 미생물의 모양들을 보다 쉽고 정확하게 관찰할 수 있는 방법들을 알아보았다.
2-8 참고문헌 / SITE
미생물 실험서 이서래, 윤재영 공저 효일문화사 1995
미생물학 실험 오계현, 소재성, 송홍규 공저 신광문화사 2000
미생물학 실험서 한국미생물학회 편자 을유문화사 1998
미생물의 생물학 저자 : ThomasD. Brock. Michael T. Madian
역자 : 김병홍. 김치경. 민경희. 윤권상. 이평우. 전순배. 최영길
범한서적주식회사. 1992.8.15
미생물학 전북대 의과대학교수 하대유 편저 신일상사
ftp://bk21.gsnu.ac.kr/kimjh/class/foodmicro_lab/simple_staining.hwp
http://kr.ks.yahoo.com/service/wiki_know/know_view.html?
dnum=LAE&tnum=131652
http://prattler.hihome.com/home3-1-5.htm
http://cpl.yonsei.ac.kr/micro/textbook/text5-4.htm

키워드

광학,   현미경,   미생물,   염색,   Staining,   염료,   Dye