박층 크로마토그래피 (TLC)

소개글

박층 크로마토그래피 (TLC)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

목차
1. 실험제목
2. 시약 및 기구
3. 서론 및 원리
4. 실험의 메커니즘
5. 실험 방법
6. 결과
7. 고찰
8. 결론
9. 기타사항

본문내용

tionary phase의 charged site와의 정전기적 인력에 의해 머무름이 일어난다.
④ Size-exclusion : porous solid를 고정상으로 하여, pore size에 의해 성분의 분자량 크기에 따라서 머무르는 정도에 차이가 나타나게 된다.
⑤ Affinity : Solid support의 특정한 ligand와 한 성분 사이의 친화력에 의해 머무름이 일어난다.
크로마토그래피는 화합물들의 혼합 상태를 구성 성분들로 분리하는 방법이다. 각각의 구성 성분들로 분리함으로써, 다양한 시료 성분들을 정성적으로 그리고 정량적으로 쉽게 측정할 수 있다.
실험 방법
1. 20×20cm TLC를 유리칼로 손상되지 않게 주의하며 4cm 또는 5cm 단위로 작게 잘라준다.
2. 작게 자른 TLC판에 시료 azobenzene, benzophenone, cholestrol과 모두를 섞은 시약 4개를 모세관으로 TLC판에 살짝 찍어준다.
3. hexane/ethanol 2/1, 5/1, 9/1 비율로 섞여있는 용매를 밀폐시킨 용기에 실험2에서 준비한 TLC를 마킹한 부분이 용매에 잠기지 않게 넣는다.
4. hexane/ethanol 2/1, 5/1, 9/1 용매를 사용한 TLC를 검출해보고 육안으로 보이지 않을 경우에는 자외선 램프로 검출한다.
5. UV램프로 검출되지 않는다면 고체 요오드가 담긴 밀폐된 용기에 넣어본다. 또 다른 방법으로는 PMA(phospho molybidc acid)용액을 뭍힌 다음 Heat Gun 으로 열을 가해본다.
6. 각 시료의 구분이 쉬운 TLC판을 찾아서 Rf값을 구해 본다.
실험 결과
20×20cm TLC판을 유리칼을 사용하여 5cm 길이로 잘라보았다. 그리고 시약 azobenzene benzophenone cholestrol과 세 시약을 섞은 용액을 Hexane/ethanol 5/1, 2/1, 9/1 비율로 섞은 용매로 TLC판에 로딩한 결과는
hexane/ethanol 5/1
Rf
a
3.3cm
0.87
b
2.6cm
0.68
c
1cm
0.26
3.8cm
hexane/ethanol 5/1
Rf
a
3.2cm
0.86
b
2.6cm
0.68
c
1.1cm
0.28
3.8cm
hexane/ethanol 5/1
Rf
a
2.9cm
0.85
b
2.4cm
0.70
c
0.8cm
0.23
3.4cm
hexane/ethanol 9/1
Rf
a
0.7
0.18
b
0.1
0.02
c
0
0
3.7
hexane/ethanol 2/1
Rf
a
2.6
0.81
b
2.4
0.75
c
1.8
0.56
3.2
위 표와 같은 결과가 나왔다.
고찰
hexane/ethanol 의 비율을 5/1 2/1 9/1 로 실험을 하였는데, TLC에서 로딩한 시료가 올라간 위치가 중간정도가 되어야 하는데 알맞은 비율의 전개용액을 알아보기 위해서 다른 농도의 전개용액으로 실험한 결과 2/1비율의 hexane/ethanol는 너무 올라가버렸고 9/1비율의 hexane/ethOH는 조금밖에 올라가지 않아 구분이 잘 되지 않았다. hexane/ethanol 5/1 비율의 전개용액이 중간정도에 위치하므로 실험에 알맞은 전개용액이며
hexane/ethanol 5/1
Rf
a
3.3cm
0.87
b
2.6cm
0.68
c
1cm
0.26
3.8cm
위 표와같은 결과가 나왔는데,
실험을 통하여 크로마토그래피의 원리를 알 수 있었다. 시료 ABC와 세 시료를 섞은 M 시료를 크로마토그래피에 전개시키면 극성의 차이로 분리가 되는데, 각 시료가 올라간 높이를 보면 A B C 시료의 각각 올라간 높이를 M시료가 분리된 것과 비교하여 구분할 수 있었다. hexane/ethanol 5/1 비율에서 Rf는 비슷했는데, Rf는 전개용매와 고정상에 대한 해당 물질의 상호관계정도를 나타낸다. 일반적으로, 동일 물질이라면 동일 전개용매 조건에서 동일한 Rf를 가지는데, 이러한 성질을 이용해 TLC에 전개된 시료의 위치를 통해 대략적으로 특정 물질의 존재 여부를 판단 할 수 있었다.
결론
이 실험을 통해 박층크로마토그래피의 원리를 알 수 있었다. 시료가 전개용액을 따라 올라간 거리를 Rf값을 이용하여 비교하면서 이 혼합시료의 성분이 무엇인지 알 수 있었다.
주의사항
UV램프를 사용할 때, 자외선이 직접 피부에 닿지 않도록 주의한다.
PMA나 요오드는 산화제이므로, 사용할 때 피부에 닿지 않도록 주의한다.
2020cm TLC를 유리칼로 자를 때 주의하고 실리카겔 부분이 오염되지 않도록 주의한다.

키워드

크로마토그래피,   TLC,   Rf