04.박테리아 생장곡선 : 균의 수를 측정하고 세균의 생장곡선을 그리는 법과 분광광도계에 대해 알아보도록 한다.

소개글

04.박테리아 생장곡선 : 균의 수를 측정하고 세균의 생장곡선을 그리는 법과 분광광도계에 대해 알아보도록 한다. 에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1.실험주제

2.실험목적

3.개요
1)미생물의 생장
2)세균의 생장곡선
3)미생물의 생장과정
4)균수의 측정방법
5)흡광도
6)미생물의 생장에 영향을 미치는 요인
7)바이러스

6)실험기구 및 시약

4.실험방법

5.실험결과

6.고찰

7.참고문헌

본문내용

라지고 활발하게 일어나는 시기이다. 정지기는 생균 수와 사멸된 균 수가 거의 같아져 총균 수가 최대가 되고 생장속도는 일정하게 유지되며 배지 내의 유해산물이 증가하여는 시기이다. 사멸기는 배양시간이 길어짐에 따라 배지 내의 유해 산물이 증가하여 사멸된 균 수가 생균 수보다 증가하여 생장속도가 점점 감소하는 시기이다.
실험과정을 보면, TSB배지를 기준으로 삼기위해 큐벳에 넣고 TSB배지에 배양액을 넣은 시료를 큐벳에 넣어 분광광도계에 넣어준다. TSB배지를 넣거나 증류수를 넣거나 물질의 종류에 따라 흡광도 값이 달라지게 되는데 이를 통해 미생물의 성장을 알 수 있다. 흡광도를 측정할 때 주의할 점은 TSB배지가 갖는 흡광도 값을 ‘0’으로 잡아야 한다는 것이다. ‘0’으로 잡지 않으면 흡광도 값이 제대로 측정되지 않기 때문이다. 또한 큐벳에 시료를 넣을 때 큐벳의 투명한 부분에 빛이 닿이도록 넣어야하고 손으로 잡고 이동 시에는 불투명한 부분을 잡고 이동해야한다. TSB배양액만 넣어 측정하였을 때는 흡광도가 감소하지만 TSB배지와 배양액을 넣은 시료의 흡광도를 측정하였을 때는 흡광도가 증가하게 된다. 흡광도를 시간별로 측정하여 그 값을 통해 미생물의 생장곡선을 그릴 수 있다. 또한 시간별로 overlay하면 Cell counting을 통해 시간이 지날 수 록 배양된 균의 수가 증가하는 것을 알 수 있다. 이번 실험에서는 Bacillus균, Enterococus균, E.coli균 10, 10희석액을 흡광도 측정과 셀카운팅에 사용하였는데 10, 10희석액을 TSB배지에 다 넣어 섞고 1ml씩 다시 각각 뜬 뒤 마이크로 튜브에 보관하여 흡광도 측정에 이용하고 나머지는 쉐이킹 인큐베이터에서 반복하여 1시간 씩 배양하고 흡광도를 측정한다. 우리 조는 희석액 별로 튜브에 분리하기는 하였지만 실험 시 희석액 별로 흡광도를 측정해보지는 못했다. 그러나 더 희석 될수록 흡광도값이 감소하고 셀카운팅 시 균의 수가 작아지는 것은 예상할 수 있다.
이번 실험에서 의문이 들었던 점은 첫 번째로, 분광광도계의 흡광도 측정 원리이다. 빛이 물체에 닿이면 빛은 물체의 표면에서 반사되거나 물체의 표면에서 내부로 조금 들어간 후 반사되거나 물체에 흡수되거나 물체를 통과하는 빛으로 나누어진다. 즉, 분광광도계는 이러한 빛의 흡수현상을 이용해서 자외선 및 가시광선영역에서 시료 중의 빛을 흡수하는 화학물질의 양을 정량하여 흡광도를 측정하는 것이다. 빛이 시료를 통과하게 되면 시료에 의해 빛이 흡수되어 빛의 강도가 약해지고 분광광도계에서 흡광물질이 존재하지 않았을 때의 빛의 강도인 T=1/10으로 표시되기 때문에 빛의 통과율은 항상 1보다 작게 표시된다. 또한, 물체에 의해 흡수 된 빛의 양은 농도에 따라 달라진다. 빛의 통과율은 시료의 농도와 상관관계가 있지 않지만 흡광도는 시료의 농도와 일정한 상관관계를 나타낸다. 따라서 Lambert-Beer의 법칙에 의해 A(흡광도) = K(흡광물질의 상수) × C(흡광물질의 농도) 라는 식을 얻을 수 있다.
두 번째로, 분광광도계의 오차발생의 원인이다. 우리 조는 흡광도 그래프와 셀카운팅 그래프가 거의 비슷하게 나와 오차의 발생이 그리 크지는 않아 보이지만 작은 실수나 오류에 의해 오차가 반드시 생겼을 것이다. 분광광도계의 원차의 원인으로는 먼저, 큐벳에 의한 오차이다. 큐벳을 넣을 때는 투명한 부분이 빛에 닿이도록 넣어야하는데 손으로 잡고 이동시킬 때 그 부분에 이물질이 닿이지 않도록 불투명한 부분을 잡아야한다. 지문이나 다른 이물에 의해 빛의 투과도가 달라져 오차가 발생할 수도 있기 때문이다. 또한, 큐벳을 한번 사용하고 물에 씻어 사용하였는데 이때, 앞에 썼던 시료나 물이 깨끗하게 세척되지 않아 남아있을 수 있고 휴지나 다른 것으로 닦을 때 이물이 묻어 오차가 발생할 수도 있다. 다음으로, 실험과정에서의 오류이다. 희석액을 만들거나 배지와 섞을 때 측정한 양의 값이 달라질 수 있기 때문이다. 피펫을 이용해서 최대한 정확하게 측정하려고 하였지만 미세한 정도의 차이는 육안으로 확인이 불가능하기 때문에 이에 의해 오차가 발생하였을 수 있다. 다음으로 기계에 의한 오차 일 수 있는데 이는 그래프 값이 거의 동일하게 나왔고 다른 조와도 거의 비슷하기 때문에 이번실험에서 기계적 결함에 의한 오차는 없는 것으로 보인다.
이번 실험은 분광광도계라는 기계의 사용방법과 흡광도 값에 따라 미생물의 생장곡선을 그려보면서 미생물의 생장과정을 이해 할 수 있는 실험이었다. 기계를 이용하여 실험하는 실험이었기 때문에 희석하는 과정이나 1시간마다 확인해야 하는 번거로움 빼고는 쉽고 간단한 실험이었다. 분광광도계는 책이나 이론 상 으로는 많이 보고 들어봤지만 실제로 사용해본적은 처음이라서 복잡하거나 하지 않을까 걱정했었는데 생각보다 조작이 쉽고 간단하였다. 또한 분광광도계의 작동원리를 이해하면서 빛의 투과성과 Lambert-Beer에 대해서도 간단히 알 수 있었다. 이번 실험에서도 실험과정 중 실수로 오차발생이 생겨 실험결과에 요인을 주는 것들이 많이 있었는데 결과 값이 거의 일치하게 나왔지만 사소한 부분에서도 오류가 발생할 수 있다는 것을 알고 앞으로도 좀 더 오차발생을 줄이는데 주의를 기울여가며 실험을 해야겠다.
7.참고문헌
-농촌진흥청, 농촌진흥청
-강영희, 생명과학대사전, 아카데미서적, 2008
-한국식품과학회, 식품과학기술대사전, 광일출판사, 2008
-오계헌 강형일 소재성 송홍규 이병욱 공저, 최신미생물실험, 신광문화사 p.89~90
-미생물학 실험교재 편찬위원회 편, 미생물학실험 기초와 응용, 월드사이언스 p.45~49
-김창한 외 6명, 일반미생물학, 류한문화사 p.157~181
-위키백과, 2001 http://www.wikipedia.org
-doopedia 두산백과, 두산동아 2010
-Clark, Martinko, Dunlap, Madigan 저, Brock의 미생물학, 바이오사이언스, 2009.04.15
-광용어 사전 편찬회, 광용어사전, 일진사, 2011
-대한간호학회편, 간호학대사전, 한국사전연구사
-화학용어사전편찬회, 화학용어사전, 일진사, 2011

키워드

박테리아생장곡선,   박테리아,   생장곡선,   미생물실험,   미생물실험레포트,   흡광도,   균수,   박테리아 성장곡선