단백질 정량 레포트

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단백질 정량 레포트에 대한 보고서 자료입니다.

목차

단백질 정량법


1. 실험원리

2. 준비물

3. 실험방법



단백질 정량법 ( 2 번 째 실 험 )

3. 실험방법

4. 실험결과



단백질 정량법 ( Lowry 단백질 정량 실험 )

1. 실험원리

2. 준비물

3. 실험방법

4. 실험결과



단백질 정량법 ( 미지시료 정량 실험 )

3. 실험방법

4. 실험결과

5. 고찰



단백질 정량법 ( 마지막 실험 )

3. 실험방법

4. 실험결과 및 고찰

본문내용

측정기로 측정한다.
4. 실험결과
사 용 량
→
측정값
BSA (l)
DW (l)
뷰렛시약(l)


0
100
1
0.042
0.073
20
80
1
0.086
0.098
40
60
1
0.114
0.127
60
40
1
0.157
0.184
80
20
1
0.197
0.200
100
0
1
0.226
0.235
단백질 정량법
( Lowry 단백질 정량 실험 )
1.실험원리
- 2가의 구리이온 단백질 펩티드 결합과 접하게 되면 1가의
이온으로 환원되는데, 단백질 용액은 알칼리조건에서
CuSO4와 결합 보라색 착화합물 형성 -> 분광광도계로 정량
(뷰렛반응의 원리를 응용하여 Lowry 단백질 정량 실험)
2. 준비물
A) 시약류
명 칭
사 진
명 칭
사 진
CuSO4
BSA
Sodium Potassium Tartrate
페 놀
NaOH
KI
B) 초자류 및 기구류
명 칭
초자류 및 기구류
Effendorf 시험관
메스실린더
용량플라스크
비이커
마그네틱 바
교반기
전자저울
파라필름
약포지
약수저
라벨지
세척병
네임펜
변압기
피펫
필러
마이크로 피펫
시험관
킴테크
볼텍스 믹스
3. 실험방법
A ) Lowry시약 (A), Lowry시약 (B) 제조
Lowry시약 (A)
NO2CO3 10g, NaOH 2g 측정 후 비커에 증류수 100ml를 넣고 교반기로 녹인다.
100ml 용량플라스크에 옮겨 담은 후 파라필름으로 막는다.
Lowry시약 (B)
CuSO4.5H2O(황산구리) 0.1g, Sodium Potassium Tartrrate 0.2g 측정 후 증류수 20ml를 넣고 교반기로 녹인다.
용량플라스크에 옮겨 담은 후 파라필름으로 막는다.
피펫 필러를 사용하여 Lowry시약 (A) 50ml를 취한 후 용량플라스크에 넣고
Lowry시약 (B) 1ml를 취하여 섞는다. (Lowy 시약)
B ) 아래 표에 맞게 시험관에 제조한 후 각각의 시험관에 Lowry시약 1ml씩을 넣고 교반시킨다.
BSA(l)
DW(l)
→
10분 정도 방치 후 페놀시약을 각 시험관에 100(l)씩 넣고 교반시킨다.
0
100
20
80
40
60
남은 Lowry시약 (A), Lowry시약 (B), Lowry시약, (A) 50 : 1 (B) 비율로 섞은 시액은 입구를 파라필름으로 막은 후 보관해둔다.
60
40
80
20
100
0
C ) (A) 50 : 1 (B) 비율로 섞은 시액을 제조한다.
피펫 필러로 Lowry시약 (A) 50ml를 취한 후 Lowry시약 (B) 1ml를 취하여 섞는다.
시험관에 밑에 표에 맞게 제조한다. (2번 반복)BSA(l)
DW(l)
0
100
20
80
40
60
60
40
80
20
100
0
Lowy시약 1ml씩을 각각의 시험관에 넣은 후 볼텍스 믹스로 섞어준다.
15분간 방치
페놀 100l를 각각의 시험관에 넣는다.
흡광도를 측정한다.
4. 실험결과
사 용 량
→
측정값
BSA (l)
DW (l)
뷰렛시약(l)


0
100
1
0.042
0.073
20
80
1
0.086
0.098
40
60
1
0.114
0.127
60
40
1
0.157
0.184
80
20
1
0.197
0.200
100
0
1
0.226
0.235
단백질 정량법
( 미지시료 정량 실험 )
3. 실험방법
아래의 표에 맞게 시험관에 희석을 해준다.
미지 시료 A 두 번 / 미지 시료 B 두 번 총 16개의
시험관이 필요
미지시료A or B (l)
DW (l)
희석 농도
12.5
87.5
8배 희석
25
75
4배 희석
50
50
2배 희석
100
0
원액 (희석x)
첫 번째 실험에서 제조한 Lowy시약을 각 각의
시험관에 1ml 씩 넣어준 후
15분간 방치 후 페놀 100 (l)를 각각의 시험관에 넣는다.
분광광도계로 측정한다.
4. 실험결과
시료A
시료A
시료B
시료B
0.243
0.337
0.165
0.193
0.185
0.262
0.155
0.165
0.146
0.238
0.126
0.150
0.174
0.152
0.109
0.143
-> 실험결과의 측정값이 이상한 순서대로 나오는 경우가 있었습니다
원인을 알아 본 결과 0점 즉 오토제로를 하는 과정에서 앞의 조에서
오토제로를 정확하게 하지 않았으며 셀의 방향조차 잘못 넣어 있었다는
부분을 알아냈습니다.
5. 고찰
- 이번 미지시료를 정량하면서 느낀점은 일단은 조에 비해서 UV 측정기가
현저하게 적으며 시간이 충분하지 않았다는 점과 생각했던 값과는 달리
정확한 값이 나오지 않아서 시간이 더 소비되지 않았는가 생각됩니다.
이번 단백질 정량뿐만 아니라 다른 Lowry 시험 뷰렛 시험을 통해서 성분이
얼마만큼이 들어있는가를 정확하게 알 수 있었던 실험이라서 이제 과에서
배워가는 분석이 어떤 것인가를 알 수 있었습니다. 앞으로의 시간이
많지만 더 열심히 참여해서 수업에 있어서 더 많은 실험을 제것으로 만드는
기회를 가지고 열심히 하겠습니다
끝으로 복학생이지만 6개월 이라는 남짓의 시간동안 교수님께서 알려주시는
수업과정 과정에서 많은 것을 배울 수 있었던 기회였던 것 같습니다
2학년 과정에서도 더 열심히 하겠습니다 수고하셨습니다.
단백질 정량법
( 마지막 실험 )
3. 실험방법
아래의 표에 맞게 시험관에 희석을 해준다.
미지 시료 A 두 번 / 미지 시료 B 두 번 총 26개의
시험관이 필요
미지시료A or B (l)
DW (l)
희석 농도
12.5
87.5
8배 희석
25
75
4배 희석
50
50
2배 희석
100
0
원액 (희석x)
첫 번째 실험에서 제조한 Lowy시약을 각 각의
시험관에 1ml 씩 넣어준 후
15분간 방치 후 페놀 100 (l)를 각각의 시험관에 넣는다.
분광광도계로 측정한다.
4. 실험결과 및 고찰
이번 실험에서는 결과 값의 수치가 너무나도 정확하지 않았습니다. 그래서 따로 표를 만들어서 정해놓지 않고 사진으로 대체하였습니다. 파장이 다른 기기를 사용하여 측정 하여서 그런지 다른 조 역시 값이 정확하게 나오지 않았습니다. 마지막 실험이라 약간은 느슨하게 진행되어진 이번 실험에서 OD값이 무엇인지 그리고 값의 개연성이 얼마나 정확한지를 알아보는 실험이었습니다. 수고 하셨습니다. 교수님

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