크로마토그래피(chromatography) - HPLC를 이용한 카페인 정량

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크로마토그래피(chromatography) - HPLC를 이용한 카페인 정량에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

식품 기기 분석 실험 보고서
1.
주제 1) HPLC (high performance liquid chromatography) : 커피, 홍차, 녹차의 caffeine 분석
2) GC (gas chromatography) : 오렌지의 리모넨 성분 분석
2.
재료 및
기구 HPLC, 카페인 표준품, methanol, D.W, micropipette, 10ml volumetri flask, C18 카트리지, Adapter, 3ml 주사기, syringe filter
3.
실험 목적
및
원리 목적 1) HPLC로 음료(커피, 홍차, 녹차)의 caffeine을 정량할 수 있다.
2) GC로 오렌지 껍질의 향기성분을 분석할 수 있다.
원리 HPLC의 작동원리는 일반적인 크로마토그래피와 매우 유사하다. 액체상태의 분석체는 칼럼 내의 정지상을 통과할 때 여러 물리화학적 친화도에 따라 머무르는 시간이 상이하고 이를 이용하여 분리하는 원리이다.
LC의 칼럼은 충전식 칼럼이 대부분이며 고형의 중심체에 여러 정지상들이 코팅되어 있는 형식을 취한다.















4.
실험
방법
1) 표준용액 만들기
① 카페인 표준품 10mg을 100ml 부피플라스크에 넣고 전체 부피가 100ml가 되도록 30% 메탄올 수용액으로 묽힌다. ( 농도: 100ppm)
② 마이크로피펫 ①의 용액 200, 400, 600, 800ul와 30% 메탄올 수용액 800, 600, 400, 200ul를 각각 혼합하여 전체 부피가 1ml가 되도록 한다.
(농도: 20, 40, 60, 80 ppm)
③ Calibration curve를 작성한다.

2) 시료용액 만들기
① 50ml Beaker에 음료(커피,홍차,녹차)를 취한다.
② 메탄올 25ml와 d.w 25ml l를 섞어 50%의 메탄올을 제조한다.
③ 음료 2ml를 메탄올과 초순수로 활성화시킨 C18 카트리지에 흡착시킨다.
④ d.w 5ml로 세척하여 카페인 외의 불순물을 흘려보낸다.
⑤ 10ml 부피 플라스크에 C18 카트리지를 대고 50% 메탄올 수용액 5ml를 흘려넣어 용출(caffeine)한다.
⑥ 10ml 부피 플라스크의 표시선까지 초순수를 넣어 전체 부피가 10ml가 되도록 묽힌다.
⑦ 시료 용액을 균질화 시킨다.
⑧ 추출 시료를 바이알의 절반 정도까지 취하여, HPCL 기기에 바이알을 꽂는다.




3) HPLC 분석 조건
표준용액과 시료용액 1ml를 0.2um syringe filter로 여과하여 다음과 같은 조건으로 분석

Condition
Column
Detector
Mobil phase
Flow rate
Injection volume Zorbax Eclipse XDB-C18 (3.0 x 100mm, 3.5um)
UV 280nm
Methanol : water ( 30 : 70 )
0.3ml/min
1ul

키워드

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