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생물학 실험 예비보고서 - PCR을 이용한 유전자 증폭
1. 실험제목 : PCR을 이용한 유전자 증폭
2. 실험일자
3. 실험목적
4. 실험기구 및 시약
5. 실험이론
-PCR이란?
-PCR증폭효율에 영향을 미치는 요인
-중합효소 연쇄반응은 다수의 DNA 서
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간에 25회로를 돌려 DNA를 105배로 증폭할 수 있다.
6. 실험방법
1) 미리 10X Buffer와 dNTP, primer, template를 서서히 녹인다.
2) 실험에 이용할 PCR 시험관에 다음과 같이 실험에 사용할 재료들을 혼합하고 pipette으로 잘 섞는다.
※ Template은 지난주에 추
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PCR 과정에서 template에 붙지 않으며, PCR과정이 끝난 후에 polymerase(polI or Klenow fragment)에 의해 restriction site에 있는 nick이 채워진다.(※ primer는 template에 상보적으로 결합해야 한다. 또한 각각 DNA의 다른 strand에 결합한다.)
* upstream primer
5' - GAATTCTTTTT
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유전자의 염기서열을 체계적으로 변화시킬 수 있게 해준다.
- PCR-based mutagenesis: PCR은 체외 돌연변이법에도 매우 유용하다.
- 돌연변이용 시발물질(mutant primer)에는 증폭하고자 하는 유전자의 특정 염기서열을 변화시키도록 변경된 염기서열이
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바나나, 브로콜리 DNA 추출 실험에서 DNA 손상으로 인한 한계를 느낌.
이에, PCR과 Cloning, 전기영동 실험을 계획.
블로팅과 유전자치료에 관심을 가지게 됨.
배경지식(
플라스미드란?
벡터란?
왜 플라스미드를 벡터로 가장 많이 이용하는
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PCR의 기본 원리
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p746-748
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p748 Abstract
Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
Disc
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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PCR 실험 등을 했습니다. Cas 9 벡터를 이용한 유전자 교정 벼의 변이집단 구축과 어린 벼의 형질전환 과정을 실험했으며
⑨지원동기 및 장래계획
? 지원동기
세계는 빠르게 변하고 제 5의 물결이 오고 있는 시대이지만 언제나 이 모든 것들은
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PCR과정에 대해서 말해주세요.
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당신의 열정을 사례를 들어 증명해보세요.
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