[생물자료] PCR[유전자진단] 원리 및 실험 방법

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본문내용

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5761 gagactgacc agcatgtgct caccacccat gttaactagg cagcccacca aacccaccac
5821 catttttttt tgacttctat aggtatttaa gtttgacacc atatctgaga aaacatctga
5881 tcagatccac ttcttctttg ccaaactgaa ctgccgactc tatcgaaaag ccaacaaatc
5941 ctccaagtta gtatcagcca atcgcctttt tggagacaaa tcccttacct tcaatgagac
6001 ctaccaggac atcagtgagt tggtatatgg agccaagctc cagcccctgg acttcaaggt
6061 gagttgcaga tgttacccct gacctccgag ttcttcctct ccactcagag attgaggagg
6121 tggagaaaca gcatccaaat tcacactgct ttgctgctga agactgctgg agggctgact
6181 aaaagttaga acccctgcaa tagttattct tacttgaaac ctgagaaatc aaaggtatcc
위에서 빨간색으로 칠해진 부분이 exon 3 A sequence부분이고 파란색으로 칠해진 부분이 이번에 만들 20mer primer의 sequence부분이다. 또한 20mer primer에다가 EcoRI과 BamHI의 restriction site를 추가로 붙여야 하므로, 전체 primer는 26mer가 되며, 여기서 양 끝의 restriction site부분은 PCR 과정에서 template에 붙지 않으며, PCR과정이 끝난 후에 polymerase(polI or Klenow fragment)에 의해 restriction site에 있는 nick이 채워진다.(※ primer는 template에 상보적으로 결합해야 한다. 또한 각각 DNA의 다른 strand에 결합한다.)
* upstream primer
5' - GAATTCTTTTTTTTTGACTTCTATAG - 3'
* downstream primer
3' - CACTCAACGTCTACAATGGGCCTAGG -5'
위에서 파란색으로 칠해진 부분이 restriction site이다.
일반적으로 위와 같은 방식으로 primer를 만들 때에는 sequence를 목적으로 하는 것이고, 단순히 PCR product를 얻을 때는 증폭하고자 하는 sequence부분에 직접 primer를 만든다.
- Reference
* Gene cloning 3rd edition by T.A Brown - chapter 11 the polymerase chain reaction
* http://www.bohan.co.kr/doc/ls&bt/17/12.htm
* http://bioinformatics.weizmann.ac.il/mb/bioguide/pcr
* http://www.protocol-online.net/molbio/PCR/other_pcr.htm
* http://www.rna.co.kr

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PCR,   유전자진단,   유전자진단 방법