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. 1) Stratagene 회사에서 개발하여 판매하는 QuickChange Site-Directed Mutagenesis kit를 이용한 방법
2) uracil를 함유한 single-stranded DNA를 이용하는 방법 (Kunkel mutagenesis)
3) PCR을 이용하여 mutation을 함유한 DNA fragment를 만들어 subclone을 제조하는 방법
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uracil이 되어 adenine과 염기쌍을 형성하게 되어 염기 치환을 일으킨다.
Dimethylsulfonate(DMS), methylmethanesulfonate(MMS), N-methyl-N\'-nitro-N-nitrosoguanidine(NMNG) 등의 alkyl화제는 DNA 중의 guanine의 7 위치를 alkyl화하여 4급 암모늄질소를 생성하면 deoxyriboside 결합
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Uracil, Thymine 등의 염기로 구성되어 있다. 여기에서 Adenie, Guanine, Cytosine은 DNA와 RNA 모두에 존재하는 염기이며, Uracil은 RNA, Thymine은 DAN에 각각 다르게 존재하는 염기 구조로 DNA와 RNA의 구조적 특징을 결정짓는다. 각 염기의 구조를 살펴보면 다음
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uracil이 될 수 있으며 그렇게 되면 uracil은 adenine과 염기쌍을 이루어 원래의 G-C 염기쌍 대신에 A-U 염기쌍을 만들어 돌연변이를 일으킨다.
이 때 DNA에 원래 존재하지 않는 uracil은 DNA 회복기구에 의해 인식되어 cytosine의 탈아미노반응에 의한 변이
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uracil을 함유한 single-stranded DNA를 이용하는 방법이다. 두 개의 중요한 DNA repair 효소인 dUTPase(dut)와 uracil N-glycosylase(ung) 유전자의 결함을 가진 E.coli strain에서는 thymine 대신에 소량의 uracil을 함유한 DNA가 합성되게 된다. 이와 같은 dut-, ung- strain에
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