전기 영동 결과 Report

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전기 영동 결과 Report에 대한 보고서 자료입니다.

목차

Ⅰ. 기본정보

Ⅱ. 서론 (Introduction)
1. PCR (polymerase chain reaction)
1-1. PCR의 원리
1-2. PCR의 과정
1-3. PCR의 주재료
2. PCR 결과 확인 (전기영동, electropH oresis)
3. 전기영동의 종류
3-1. 이동 계면 전기영동법 (Moving boundary electrophoresis)
3-2. 띠 전기영동법 (Zone electrophoresis)
3-3. 불연속 젤 전기영동법 (Disc-gel electrophoresis)
3-4. SDS젤 전기영동법
3-5. 아가로오스 젤 전기영동법 (Agarose gel electrophoresis)

Ⅲ. 실험재료 및 방법 (Materials & Methods)
1. 실험재료(Materials)
2. 실험 방법(Methods)

Ⅳ. 실험결과 및 결론 (Data and Results)

Ⅴ. 고찰 (Discssion)
1. 제 1 타입은 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요.
1-1. Total cell DNA의 분리
2. 제 2 타입은 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다.
2-1. 플라스미드 DNA의 분리
3. 제 3 타입은 파지 DNA이 며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요.
3-1. 박테리어파지 DNA의 분리
※ 아가로스 젤 전기영동장치의 원리
※ Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
▶ 아가로즈(아가로스, Agarose)

Ⅵ. 참고 문헌 (Reforence)

본문내용

이동한다. 이때 DNA가 이동하는 정도는 여러 가지 요인의 영향을 받는다. 기본적으로 분자량이 커질수록 늦어지며 젤의 밀도(아가로오스 농도)가 클수록 늦어진다. 또한 DNA의 분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르다. 예를 들면 supercoiled DNA는 선형 DNA보다 빠르게 움직인다.
아가로오스 농도 (% W/V)
DNA의 분리범위 (kb)
0.3
5 - 60
0.6
1 - 20
0.7
0.8 - 10
0.9
0.5 - 7
1.2
0.4 - 6
1.5
0.2 - 3
2.0
0.1 - 2
※ Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
1) DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
2) Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
3) DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그다음 linear DNA, open circular DNA의 순으로 빠르게 이동한다.
4) 부하되는 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
5) 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
6) Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15% 정도 감소시킨다.
7) 전기영동 완충용액의 성분과 이온강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.
8) DNA loading dye
아가로즈의 well에 DNA를 넣어줄 때 DNA용액을 무겁게 하여 아가로즈의 홈으로 가라앉히는 역할을 하며 그 성분에 전기영동되는 속도가 다른 두개의 염색시약이 들어 있어 DNA와 같이 전기영동되며 DNA의 전기영동된 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다.
▶ 아가로즈(아가로스, Agarose)
Agarose란 우뭇가사리나 꼬시래기같은 한천질을 가진 홍조식물류를 수확하여, 세척-자숙(고열로 끓임)-여과-응고-동결-융해-탈수-건조의 과정을 반복하여 한천(agar)를 만든 뒤 한천에서 agaorse 구성 성분을 제외한 불순물(agaro-pectin과 칼슘, 나트륨, 황 등)을 정제과정을 통해 분리, 제거하여 백색 분말형태로 만든 시약이다.
이 Agarose분말을 TAE buffer나 TBE buffer에 1~5%농도로 넣어 끓은 후 식히면 젤리모양으로 변하는 Gel화(gelling)가 일어난다. 이 아가로즈젤은 상당히 단단하여 네모난 틀에 부어넣고 빗모양의 comb을 꽂아 홈을 만들어 전기영동용 gel을 만들어 핵산의 분리 및 확인 등에 사용한다. 아가로즈의 분자구조는 galactose and 3,6-anhydrogalactose의 중합체로 되어 있으며, gel 화 하였을 때 전기적으로 중성인 망상구조를 가진다. 이 망상구조의 특성을 이용하여 주로 DNA나 RNA의 분리에 많이 사용하는데 gel의 양쪽에 전기장을 걸어 줄때 (-)전기를 띈 DNA나 RNA가 전기장의 +극쪽으로 이동하게 되는데 이때 분자량이 큰 조각일수록 이동속도가 느려져 작은 사이즈의 조각들과 시간이 갈수록 분리되게 되며 결과 다음과 같은 사진이 만들어진다.
가장 위쪽에 DNA나 RNA 수용액을 넣는 홈이 횡방향으로 나란히 만들어 져있다. 이 홈들에 각각의 DNA나 RNA를 넣고 위쪽에 (-)전기를, 아랫쪽에 (+)전기를 걸어주면 (-)전기를 띈 핵산이 아랫쪽의 (+)전기장쪽으로 이동을 한다. 이때 아가로즈젤의 구멍을 통과해야 하므로 분자량이 큰 핵산의 조각들은 이동속도가 느려져 뒤에 처지게 되고, 상대적으로 작은 조각들은 (+)전기 쪽으로 빠르게 이동한다. 크기와 형태가 같은 핵산의 조각들은 이동속도가 같으므로 홈(well)의 넒이와 같은 길이의 수평선을 형성한다. 이선을 보통 band라고 부른다.
원하는 크기의 핵산을 확인하거나 크기를 모르던 핵산 조각의 크기를 가늠해 볼 수 있는데 이때는 인위적으로 만든 여러 크기 핵산조각을 섞어만든 \'size marker\'를 같이 gel에 넣고 전기영동하여 이미 알고 있는 size marker의 밴드의 이동거리와 비교하여 상대적인 크기를 가늠한다.
아가로즈는 이외에 단백질이나 기타 고분자의 분리, 검출키트, DNA분리 정제, 핵산의 보관 등 그 쓰임새가 광범위하다. 전세계에 3~5개 정도의 제조회사에서 생산하는 것으로 알려져 있다.
아가로즈의 용도는?
아가로스는 원료 및 제조과정에 다라 순도, 투명도, 분해능, gel화 되는 온도, 녹는 온도 등에 차이가 있다.
녹는점과 gel화 되는 온도가 낮은 아가로즈를 low melting 아가로즈라고 하는데 gel내부에서 효소반응을 시키거나 gel에서 DNA를 분리하여야 하는 경우 이런 종류의 아가로즈를 사용한다.
한편 sourthern/northern botting을 할 경우에는 gel이 membrane사이에서 강한 압력을 받아야 하므로 강도가 높은 gel을 사용하고, fragment size의 차이가 크지 않거나 크기를 알수 없는 DNA band들의 출현 가능성이 높은 실험을 할 경우엔 band가 보다 샤프하게 나와서 분해능력이 높은 특수한 아가로즈를 사용한다.
아가로즈 gel의 일반적인 사용범위는 다음과 같다.
DNA/RNA의 분리, Southern Blots, Northern Blots, In-Gel reaction, DNA fingerfrinting, DNA/RNA recovery, DNA 분리(1~50kb), DNA 유무 확인
Ⅵ. 참고 문헌 (Reforence)
네이버 지식백과, PCR [polymerase chain reaction], 생명과학대사전
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=2694811&cid=60261&categoryId=60261#__datalab
다음 블로그, 안녕하세요 ~!!, [스크랩] 전기영동(Electrophoresis), 감동그리고환상, 2011.09.18 22:12
http://blog.daum.net/soar7007/7965306
작전명 공부하는 대학생들, 의데공대생, Plasmid DNA Mini Prep, 2013.10.31
캠벨 생명과학 포커스 2판, Lisa A. Urry 외 4명, ㈜바이오사이언스출판, 2019
핵심 일반생물학 실험서, 오병운 외 5명, ㈜바이오사이언스출판, 2018

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일반생물학,   실험리포트,   실험,   전기영동